第十九章经典液相色谱法.pptVIP

第19章 平面色谱法 第二节 薄层色谱法（TLC） 第二节 薄层色谱法（TLC） 第二节 薄层色谱法（TLC） 硅胶的活化 硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数高，吸附力弱。 活化：将硅胶在105～110℃加热30分钟，除去水，使硅胶吸附力增强的过程。 第二节 薄层色谱法（TLC） 第二节 薄层色谱法（TLC） 第二节 薄层色谱法（TLC） 第二节 薄层色谱法（TLC） 薄层色谱法的应用 第三节 纸色谱法 纸色谱法：以纸作为载体的色谱法 固定相：滤纸纤维上吸附的水分 流动相（展开剂）：不与水混溶的有机溶剂 分配色谱法 * * plane chromatography 平面色谱法是在平面上进行分离的一种色谱方法。 一、平面色谱法的分类 薄层色谱法 纸色谱法 将固定相均匀地涂铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，点样后用展开剂（流动相）将其展开，然后将薄层板斑点定位后分析的方法。 薄层扫描仪 以纸作为载体的色谱法，分配色谱 固定相：纸纤维上吸附的水份 流动相：不与水相混溶的有机溶剂 2、相对比移值 1、比移值 0.2～0.8 二、平面色谱法参数 定性参数 0.3～0.5 二、平面色谱法参数 （二）分配系数与容量因子 1. 容量因子越小，组分的迁移速度越快，比移值越大；反之亦然。 2. 混合物中各组分容量因子差异越大，越容易分离，故也可以认为：容量因子不等是组分分离的前提。 二、平面色谱法参数 （三）分离度 薄层色谱法是将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝箔上，成一均匀薄层、经点样、展开欲显色后，与适宜的对照物质在同一薄层板上所得的色谱斑点作比较，用于进行定性鉴别或含量测定的方法。 吸附薄层色谱法 固定相——吸附剂 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表面积，表面有许多吸附中心。 硅胶：SiO2·xH2O 吸附机理：形成氢键 高 Ⅴ 38 Ⅳ 25 Ⅲ 15 Ⅱ 5 高 Ⅰ 0 活性 活性级数 硅胶的含水量% 低 硅胶具有弱酸性，适于分离酸性和中性物质，如 有机酸、氨基酸、甾体。碱性物质因与硅胶作用，展开时会出现拖尾甚至滞留于原点的现象。 氧化铝 中 性 碱 性 酸 性 （二）展开剂 （二）展开剂 选择原则：被分离物质的极性、展开剂的极性 （1）单一溶剂 （2）混合溶剂 （3）分离酸性组分，可加入一定的酸，分离碱性物质，可加入一定的碱。 结晶紫、亚甲基蓝：正丁醇：水: 乙酸 在薄层色谱中，以硅胶为固定相，氯仿为展开剂时，组分A的Rf太大，若改用氯仿-甲醇（3︰1）作展开剂，则：组分A的Rf将如何变化，为什么？ 三、薄层色谱操作方法（p379） 制板 点样 展开 显色 边缘效应: 同一化合物在同一块板上时, 处于边缘的点,其Rf值大于中心的点. 原因: 展开剂的挥发速度由薄层板中央到边缘逐渐增大，致使在相同条件下，同一组分在边缘处的迁移距离大于中心处的迁移距离 消除办法: 展开前，薄层板应置于盛有展开剂的色谱缸内饱和15～30分钟，且不能与展开剂直接接触，待色谱缸中展开剂蒸气达饱和状态时，方可将薄层板下端浸入展开剂 三、薄层色谱操作方法（p379） 斑点的确定 （1）日光 （2）紫外 （3）荧光薄层板 （4）显色剂：碘、硫酸溶液、荧光黄 四、定性和定量分析 （一）定性分析：Rf、Rr、对照法 （二）定量分析：洗脱法、直接定量法 目视比较法 薄层扫描法 薄层扫描法（P382）：用一定波长、一定强度的光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 在药学领域中，可用于药品的纯度控制及杂质检查；监控药品合成反应历程；天然药物的有效成分分离与测定；中药的定性鉴定等 乙酰螺旋霉素的鉴别： 取乙酰螺旋霉素及其标准品，分别加甲醇制成5mg/ml的溶液，作为供试品溶液与标准品溶液。照《中国药典》2005版第二部薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一薄层板上（取硅胶G0.6g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液2.5ml，研磨成糊状，搅匀后，涂布在20cm×5cm玻璃板上，晾干后，于105℃活化30分钟），以甲苯-甲醇（9:1）为展开剂，展开、晾干后，置碘蒸气中显色。供试品溶液所显的四个主斑点的颜色和位置应与乙酰螺旋霉素标准品溶液的四个主斑点的颜色和位置相同。 分离机理：根据溶解度的不同实现分离 相似相溶 练 习 　　　　　　 　　　　 　 （1）三种糖的极性顺序如何？ （2）在相同条件下进行纸色谱分析，它们的比移值顺序如何？ 1＞3＞2 1＜3＜2