蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预及机制初探-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 3 蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预及机制初探 专 业 临床检验诊断学 研究生 关 丽 导 师 蒋红梅教授 王豫萍副教授 摘 要 目的：观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF）、基质金属蛋白酶-9（Matrix metallopeptidase- 9 ，MMP-9） 以及基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（tissue inhibitor of metalloproteinases-2, TIMP-2）表达的影响，探讨其抗肝纤维化的可能机制。 方法：健康雄性 Wistar 大鼠 60 只，随机分为 6 组，正常对照组、肝纤维 化模型组、蓝莓原浆低、中、高剂量干预组、复方鳖甲软肝片干预组。肝纤维 化模型组及各干预组大鼠给予无菌猪血清腹腔注射(0.5mL/只，每周两次)，制备 大鼠肝纤维化模型，共 12 周。造模的同时，蓝莓原浆低、中、高剂量干预组及 复 方 鳖 甲 软 肝 片 干 预 组 分 别 给 予 蓝 莓 原 浆 （ 0.25mL/100g 、 0.5mL/100g 、 1.0mL/100g）、复方鳖甲软肝片（0.054g/100g）灌胃，每日一次，共 12 周。计 算各组大鼠肝脏指数；测定血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase， ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）和透明质酸 （hyaluronic acid HA）水平；检测肝组织匀浆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ，SOD)活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA)的含量；并进行肝组 织病理学检查（HE 染色和 Masson 染色）；实时荧光定量 PCR 和免疫组织化学 法检测大鼠肝组织 HGF、MMP-9、TIMP-2mRNA 及蛋白的表达。 结 果 ： 与 正 常 对 照 组 比 较 ， 肝 纤 维 化 模 型 组 大 鼠 肝 脏 指 数 明 显 增 加 （P0.05）；血清 ALT、AST 水平有所升高，但无统计学意义（P0.05）；肝组 织匀浆 SOD 活性明显下降（P0.05），MDA 含量明显增高（P0.05）；HE、 Masson 染色显示有明显肝纤维化（P0.05），胶原表达明显增多；肝组织 HGF、 MMP-9、TIMP-2mRNA 和蛋白表达升高（P0.05）。与肝纤维化模型组比较， 各干预组大鼠血清 ALT、AST 水平有所下降，但差异无统计学意义（P0.05）； 肝脏指数明显减少（P0.05）；蓝莓原浆中、高剂量干预组及复方鳖甲软肝片干 预组大鼠肝组织匀浆 SOD 活性明显升高（P0.05），MDA 含量明显降低 （P0.05）；肝纤维化程度明显减轻（P0.05），胶原表达减少；肝组织 HGF、 MMP-9 mRNA 和蛋白表达明显升高，TIMP-2mRNA 和蛋白表达明显降低 （P0.05）。 结论：蓝莓对猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化有一定的干预作用，其机 制可能与蓝莓提高机体抗氧化应激能力以及上调 HGF、MMP-9，下调 TIMP-2 的表达有关。 关键词 肝纤维化；氧化应激；HGF ；MMP-9 ；TIMP-2；蓝莓 前 言 肝纤维化（hepatic fibrosis，HF)是继发于各种原因引起的肝脏炎症或损伤 后组织修复过程中的代偿反应，是慢性肝损伤发展为肝硬化、原发性肝癌的必 经之路。肝纤维化若不加以控制，其中 25%-40%最终发展为肝硬化甚至肝癌[1-3]。 虽然近年来的研究表明，肝纤维化、肝硬化是可以逆转的[4]，但肝硬化逆转难 度较大。因此，如何有效理性的治疗肝纤维化的方案，已经成为国内外研究的 热点。 HF的发生机制是一个复杂的病理过程，其中肝星状细胞(Hepatic stellate cell， HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节和共同通路[5]，当肝脏受损伤时，多种肝 脏细胞包括肝细胞、库普弗细胞、窦周内皮细胞以及来自肝外的血小板、淋巴细 胞、中性粒细胞可释放活性氧物质、一系列细胞因子和纤维原性介导物质，通过 自分泌和旁分泌的形式，引起炎症细胞浸润和炎症反应，激活HSC[6-7]。肝脏细 胞外基质（extracellular matrix, ECM）在肝脏大量沉积是肝纤维化的基本特征， 活化的HSC合成以I型胶原(Collagen type I )及III型胶原(Collagen type III)为主的 多种ECM，同时抑制ECM的降解，导致ECM产生增多及ECM降解减少。目前已 证实基质金属蛋白酶(matrix metal proteases, MMPs)及其组织抑制因子（t