量子点在生物分析中的应用.PPT

量子点在生物分析中的应用 传 统 DNA检测 生物传感器 单分子检测 核酸杂交技术 聚合酶链反应 操作复杂，条件 难控制，耗时长， 灵敏度受限制 双色重合法 双色荧光交联光谱 检测单个靶分子 底物，荧光光谱 重叠干扰 基于单量子点纳米传感器 本文根据量子点的宽激发谱带，窄且对称性好的发射谱带，高量子产率，光稳定性好的特点，基于双色同时检测法（two-color coincidence）以及荧光共振能量转移（FRET）检测法，在均相体系中的单分子水平下多通道检测HIV-1和HIV-2。 纳米传感器是以纳米级离子为敏感材料，能够探测、感受外界的信号、物理条件或化学组成，并将探知的信息传递给其他装置的功能单体或仪器。 two biotinylated capture probes： capture probe 1, 5-TAG TAA GAA TGT ATA GC-3-TEG-Biontin； capture probe 2，5-GCA ACT AAA TTC A-3-TEG-Biontin。 two alexa fluor reporter probes： reporter probe1，Alexa Fluor 488-5-CTG GGA TTA AAT AAA A-3； reporter probe2，Alexa Fluor 647-5-AAA GGA CCA GGC-3。 two target oligonucleotides： target DNA1 for HIV-1，5-GCT ATA CAT TCT TAC TAT TTT ATT TAA TCC CAG-3； target DNA2 for HIV-2，5-TGA ATT TAG TTG CGC CTG GTC CTT T-3。 Experimental Section * * * 量子点概述 当半导体材料降至一定临界尺寸后，电子在三维上的运动受到了限制，表现出量子局限效应。这类材料都称为量子点（quantum dots，QDs） 量子局限效应导致费米能级附近的电子能级由连续变为离散能级或能隙变宽，具有类似分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。 量子点又称为半导体纳米晶（nanocrystals，NCs）、半导体纳米粒子（nanoparticles，NPs） Ⅳ-Ⅳ族：SiC，SiGe； 量子点 种类 Ⅱ-Ⅵ族：CdSe，CdTe，ZnS，MgSe等； Ⅲ-Ⅴ族：GaAs，InAs，GaSb等； Ⅳ族：Si，Ge； Ⅳ-Ⅵ族：PbSe； 单量子点：Au，Pd，Co等； 量子点的光学特性 宽吸收峰：能吸收所有比它第一发射波长更短的“较蓝”的光。 窄发射峰：具有非常窄且十分对称的荧光发射光谱。 大斯托克斯位移：消除激发光和散射光等背景干扰。 光稳定性：抵抗紫外、化学物质、生理代谢对其的降解。 安全：细胞毒性低，可用于活细胞及体内研究。 高量子效率：荧光强度大，发光时间长，便于长期跟踪和保存结果。 发射波长尺寸可调：通过控制量子点大小或组成合成任意所需发射波长的量子点，达到同时检测多种指标的要求。 独特优越的光学、电子和表面可修饰性！ 量子点的应用 光电子学方面的应用：电致发光的光电子器件 80s后期，生物学家开始关注量子点在生物学方面的应用； 1998年，Alivisatos和Nie研究小组的工作： 半导体量子点在生物学研究的应用取得重大突破。 M. Bruchez, M. Moronne, P. Gin, Weiss, A. Alivisatos. Science. 1998, 281: 2013-2016. 采用两种QDs标记3T3小鼠纤维原细胞。 一种发绿色荧光（2nm）：经TEOS、尿素及乙酸作用后，对细胞核具有很强亲和力； 一种发红色荧光（4nm）：表面经生物素修饰后，与亲和素修饰的肌动蛋白丝发生特异性吸附。 QDs用于荧光生物标记 QDs用于非同位素标记生物分子的超灵敏检测 Warren C, Nie S M. Science, 1998, 281(5385): 2016-2018. QDs表面连接上巯基乙酸（HS-CH2COOH),从而使量子点既具有水溶性，还能与生物分子（如蛋白质、多肽、核酸等）结合，然后通过光致发光检测出QDs，从而使生物分子识别一些特定的物质。 A B C original QDs mercapto-solubilized QDs QD-IgG conjugates 转铁蛋白与量子点共价交联，在受体的 介导下发生内吞作用，转移至HeLa细胞 中，证明连接的量子点仍具有生物活性。 两个创新点： 发挥QDs的水溶性 将QDs与生物分子的偶联 基于QDs与生物分子间的特异性相互