细胞工程-3 动物细胞培养.pptVIP

动物细胞培养技术－2 （一）常用的培养方法 悬滴培养Hanging－drop cultivation 培养瓶培养 旋转管培养Rotate tube cultivation 克隆培养法Cloning culture technique 细胞同步化培养 动物细胞大规模培养 （1）原代培养与传代培养 取材 2 原代培养——组织块培养 3 传代培养——消化法 一般传代培养的步骤 (1)? 吸出培养瓶内旧培养液。 (2)? 加入胰蛋白酶和EDTA混合液盖满瓶底。 (3)? 2～5分钟后检查，如有细胞间隙变大，细 胞质回缩现象，终止消化。 (4)? 吸出消化液，加入PBS液，轻轻转动以 免细胞流失，洗去残留的消化液。如果单 用胰蛋白酶，可直接加入培养液。 (5)? 用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬 液，计数后记录其浓度。 （6）重新接种培养。 （二）建立细胞系过程 肿瘤细胞的体外培养与建系过程 以人上皮型食管癌109细胞系的建立为例介绍一下具体的建系过程： （1）取材 食管癌患者的手术标本 （2）原代培养 1）食管肿物组织放入含青霉素和链霉素的 RPMI 1640培养液内，于4℃下静置2小 时。 2）? 然后将组织剪切成1-2mm3的小块。用含 青霉素和链霉素的RPM