发酵工业菌种.pptVIP

生长因子产生菌的筛选 筛选模型：营养缺陷型试验菌 筛选方法：利用被分离的微生物产物能否促进营养缺陷型试验菌生长 氨基酸产生菌的筛选 样品 ? ? 预处理 ? ? 初筛（除真菌） ? ? 在分离平板上生长获得多个单菌落 复印平板（copy 法） 平板培养，其中有产生氨基酸的菌落分泌氨基酸 对应到copy前相应 u.v线杀死长好的菌落 位置，找到目的菌落 再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂 培养后 产氨基酸菌落周围有生长圈 ? ? 目的菌落进行液体培养， 对产物进行定量测定 筛选产物含量高的菌株 多糖产生菌的筛选 取样特点：碳水化合物工业的废弃物 筛选方案：从菌落外观判断，选择外观呈粘液状的菌落，然后根据液体培养测定多糖含量来筛选高产菌。 细菌分离：以乳酸菌为例 取未成熟的酱醪样品1g至无菌磨口瓶中 ? ? 加麦芽汁至瓶口处，封塞，25℃培养24-48h 培养基中长出绢丝状波动物，镜检 杆状，阳性染色 初步断定乳酸菌 ? ? 用选择性培养基分批富集培养2-3代 稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、CaCO3的琼脂培养基? ? 根据透明圈挑选菌落 ? ? 性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定） ? ? Rf值定性 （有机酸呈黄斑点） ?? 乳酸生成量测定（滴定法） 放线菌的分离：以产链霉素菌种的分离为例（从退化菌种中筛选） 取工业发酵液（含孢子）样品1环 放入带玻璃珠的装有10ml 无菌水的小三角瓶中，摇匀 ? ?采用稀释法制平板，获取单菌落 ?  斜面保藏 高产菌恢复 根据高产菌的特点，选择目的菌落 放大培养，发酵液性能测试 筛选模型：形态依据 真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例 取发酵液少许以10倍稀释成10-1-10-7 稀释分离法 取0.1ml 加入固体培养基铺平皿（×2） ? ? 在麦芽汁固体培养基上，25℃培养48-72h 形态筛选 根据正常株特点进行挑选，接种斜面备用 ? ? 纯化，采用平板分离法进一步纯化，至少反复三次 ???? ①生成子囊孢子速度测定 ②发酵力测定 性能测定 ③热死温度测定 ④凝集力测定 ⑤双乙酰含量测定 菌种选育改良的具体目标 提高目标产物的产量 提高目标产物的纯度，减少副产物 改良菌种性状，改善发酵过程 改变生物合成途径，以获得高产的新产品 发酵工业菌种改良方法 常规育种(诱变育种) 细胞工程育种 基于代谢调节的育种技术 基因工程育种 蛋白质工程育种 代谢工程育种 赖氨酸生产菌种的选育改良思路 出发菌株：黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌 育种思路 1.优先合成的转换——渗漏缺陷型的选育 2.切断支路代谢——营养缺陷型的选育：高丝氨酸缺陷型 3.抗结构类似物突变株的选育：AEC 4.解除代谢互锁：Leu- 、 抗Leu结构类似物、 喹啉s 、 苯醌s 5.增加前体物的合成和阻塞副产物的生成： Ala-、抗Asp结构类似物 选育适宜的CO2固定酶/TCA循环酶活性比突变株 6.改善细胞膜的透过机能 7. 选育温度敏感突变株 8. 应用细胞工程和基因工程育种 选育适宜的CO2固定酶/TC