医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5).ppt

医学微生物学实验综合性实验一 脓汁和粪便标本中病原菌的检测（五） 糖发酵试验 药敏试验 血浆凝固酶试验 半固体接种法 糖发酵试验 不同细菌具有不同的糖分解酶，分解各种糖的代谢产物也各不相同，有的产酸，有的产酸又产气，据此，可以鉴别各种细菌。 糖发酵管：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖。 指示剂：溴甲酚紫，PH≥6.8为紫色，≤5.2为黄色。 原理：多糖→单糖→丙酮酸、酸性产物(产气)→ pH↓→指示剂呈酸性变色。 结果:培养基变色无气泡“+” ，培养基变色有气泡“⊕”，培养基不变色“-”。 应用：观察细菌对糖的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定。 实验分组 俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。 每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为甲、乙、丙、丁。 细菌药物敏感性试验P20 磺胺1907年发现，1935年临床应用。青霉素1929年发现，1945年临床应用。 我国住院病人抗菌素使用率达70%，新生儿病房抗菌素使用率达100%。 为了避免抗菌药物使用的盲目性，防止因不合理用药，导致耐药性细菌的增多、药物中毒、治疗失败、菌群失调等问题的发生，用药前（时），做药物敏感性试验。 实验分工（每人1块平板） 甲→黄色菌液→平板 + 青、链、庆纸片。 乙→白色菌液→平板 + 青、链、庆纸片。 丙→紫黑菌液→平板 + 青、链、庆纸片。 丁→粉红菌液→平板 + 青、链、庆纸片。 实验方法 接种环取菌液3～6ul×2环（注意：操作时，不得同时握持菌液管和平板，以免菌液倒出来，造成污染）。平板密集划线接种细菌（纱窗样）。设计三点，三点之间等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。作标记：青、链、庆。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，最后镊子火焰灭菌。37℃18～24小时培养，观察结果。 ※试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半密集为宜。 血浆凝固酶试验P17 致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白,附着于细菌表面,产生凝固。 葡萄球菌产生两种凝固酶:一种是与细胞壁结合的凝固酶,为结合凝固酶;另一种是细胞释放于培养基中,为游离凝固酶；二者抗原性不同。 在体内，凝固的血浆沉积在菌体表面，阻碍吞噬细胞的吞噬和杀菌物质的破坏，从而有利于细菌的生长繁殖、引起感染。 体外试验有试管法和玻片法两种。 试管法检测游离凝固酶，结果准确。 玻片法只能检测结合凝固酶，比较简便、常作为快速筛选技术（金黄色葡萄球菌中有10%～15%可呈阴性反应）。 玻片法 取二滴兔血浆置于洁净的玻片上。 分别用接种环取白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合，立即观察结果。 出现明显凝块为阳性，否则为阴性。 ※白色菌苔容易混合均匀，黄色菌苔常涂抹不开。 ※反复旋转或侧倾载玻片，让菌液流动起来，结果更明显。 安全警告 本次实验（糖发酵试验、药敏试验、血浆凝固酶试验和半固体接种）操作一次，可能产生几百个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 思考题 细菌生化反应在感染性疾病诊断中有何重要意义? 为什么要在发酵管液面上方大约2～3cm处切割？ 培养时，微量糖发酵管管口不能朝上，为什么？ 抗生素敏感性实验有何实际意义? 血浆凝固酶试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么? 半固体穿刺接种时，为什么要强调“原路返回”? 为保证实验结果的可靠性，你认为上述试验应还设立哪些对照? * * 艇帆脯何傲铃掏腾踪牛眶煞僵娜启革幼钞甚筐批歪剖告笨魏猖鲤利汐阮原医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5)医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5) 器材准备 靛竖访扁洪魔暂花掂誓巢拇侍瞧锗矿峪颤曹瞬捕鸣钓鉴每科眠践杆绘陷呜医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5)医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5) 第旬恐砖广檬碟唆予糠爹熙斗踢椿糕壁迄圈就竭懊凝颂货蛤玲撞淫篆丫蛀医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5)医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5) 佛美桃玄抚猖农肩艘遇豁疏溅挡缄安痔眷甭砍逾哩供拯细踏埔拭峰稗扣松医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5)医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (5) 细菌的糖发酵试验P16 甲,乙→紫黑→①葡萄糖,②乳糖 丙,丁→粉红→③葡萄糖,④乳糖 2-3c