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第三节 金黄色葡萄球菌检验技术 延时符 目录 Contents 02 延时符 一、生物学概述 二、金黄色葡萄球菌定性检测 三、金黄色葡萄球菌平板计数法 根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》，按葡萄球菌的生理化学组成，金黄色葡萄球菌划为葡萄球菌属。葡萄球菌属分为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)和腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)； 其中金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。 表葡偶尔致病。 一、生物学概述 分类 环境分布：空气、水、灰尘及人和动物的排泄物 季节分布：多见于春夏季； 中毒食品种类多：奶、肉、蛋、鱼及其制品； 剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等。 分布 一、生物学特性 典型的金黄色葡萄球菌为球型，显微镜下排列成葡萄串状,革兰氏阳性、无芽孢，无荚膜。 需氧或兼性厌氧，最适生长温度30℃-37℃，最适生长pH6-7。在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ。 形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内。 具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。 生物学特性 一、生物学特性 有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。 血平板菌落周围形成透明的溶血环。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。 血浆凝固酶：一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。否则为无致病力的菌株。血浆凝固酶对热稳定，能抵抗60℃ 30min而不被破坏，甚至100℃ 30min后，仍能保存大部分活性。 生物学特性 一、生物学特性 肠毒素形成条件：①存放温度：温度越高，产毒时间越短（100cfu/g(mL)、21℃、 3h）；②存放地点:通风不良氧分压低易形成肠毒素；③食物种类:含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 污染途径：①食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；②食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；③熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；④奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。 流行病学 一、生物学特性 检样 25g(或25ml) 样品+225ml7.5%氯化钠肉汤 Baird-Parker 平板，血平板 观察溶血 报告 BHI肉汤和营养琼脂斜面 涂片染色 血浆凝固酶试验 GB 4789.10-2016 金黄色葡萄球菌的检验第一法 36±1℃ 18~24h 36±1℃ 18~24h； Baird-Parker 平板 24~48h 36±1℃ 18~24h 二、金黄色葡萄球菌定性检测 选择性增菌 金黄色葡萄球菌细胞数量增殖 36±1℃，24~48h 二、金黄色葡萄球菌定性检测 液体样品 摇匀 25mL 均质 固体样品 225ml7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 25g 36±1℃ 8~18h 划线分离 BHI 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。 圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。 革兰氏染色 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽孢 每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果 操作规程 血浆凝固酶鉴别 Baird-Parker平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏:提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠:生长促进剂 亚碲酸盐:对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄:提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂:对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。 二、金黄色葡萄球菌定性检测 注意事项 血浆凝固酶试验： 血浆凝固酶试验可选用人血浆或兔血浆。用人血浆出现凝固的时间短，约93.6％的阳性菌在1h内出现凝固。用兔血浆1h内出现凝固的阳性菌株仅达86％，大部分菌株可在6h内出现凝固。 若被检菌为陈旧的培养物（超过18～24h），可能造成凝固酶活性低，出现假阴性。