一种新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表达的研究.pdfVIP

下载本文档

7
0
约2.06万字
约 28页
2019-06-09 发布于江苏
举报
版权申诉

一种新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表达的研究.pdf

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

一种新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表达的研究第一部分第一部分 NSP019的克隆及在真核细胞中的表达为了对NSP019的功能和特性进行研究，验证生物信息学的预测结果，我们首先设计了一定的引物，通过PCR方法，从人垂体cDNA库中克隆到此基因的ORF。然后利用特定载体，在真核细胞中表达此基因，并对其进行了进一步的研究。材料与方法技术路线生物信息学分析土按预测序列，设计NSP019基因0RF的PCR引物上从人脑垂体cDNA库中PCR扩增NSP019基因(ORF) 上扩增产物回收———卜 32P标记扩增片段上上核酸内切酶酶切用Northern blot检测该分泌蛋白目的片段、质粒载体基因在组织中的分布上用DNA连接酶与载体连接一种新的分泌蛋白基因NSP019的克隆和表达的研究第一部分～一增一～一一燃一僦桃一撇～～；穹上一上一上一。一上上枷上骺上删0㈣上一一． blot验证分泌性用Western 免疫荧光法进行亚细胞定位一、实验材料 1．菌株和细胞株 DH5 克隆菌株E．coliQ，用于扩增与质粒载体连接的目的基因片段，由国家人类基因组南方研究中心保存。绿猴肾细胞株COS一7，用于NSP019基因的真核表达，由国家人类基因组南方研究中心保存。细胞用DMEM加10％的胎牛血清，置于5％cch，37C培养。 2．基因克隆的主要试剂及材料 PCR Kit purificationQIAGEN公司 GelExtractionKit QIAGEN公司 4 一种新的分泌蛋白基因NSPOl9的克隆和表达的研究 PlasmidDNA VIOGENE公司 System(Mini-M) Miniprep PfuDNA聚合酶上海博彩生物有限公司 DNA 上海申友公司 Taq polymerase NEWENGLAND 各种限制性内切酶 BIOLAB公司 T4 DNA连接酶Promega公司 3．Western blot的主要试剂及材料脂质体 GibcoBRL公司 TALON金属亲和纯化树脂 Clontech公司 9E10) Clontech公司一抗(鼠抗人C-Myc Santa 二抗(HRP-羊抗鼠IgG) Cruz公司 ECL Amersharn pl