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一种新的降血脂药物筛选技术平台的完善与应用 不具备细胞膜通透性的药物分子，通过细胞水平药物筛选可以最大程度的解决了 这些问题。细胞、分子水平的药物筛选模型与整体动物和组织器官水平的筛选模 型相比，具有材料用量少、药物作用机制明确、高通量筛选，试验操作自动化水 平高等特点。当测试样品比较珍贵或制备量有限时，分子水平，细胞水平的药物 筛选具有一药多筛，节省样品的显著优势。这种筛选方法符合药物筛选和药物发 现的基本规律，适用于高通量药物筛选。传统细胞水平的筛选模型虽然具有上述 ● 一系列优点，但往往只能观察被筛样品对细胞的作用，只能反映出药物对细胞生 长等过程的综合作用，但不能反映药物作用的具体途径和靶点。 基因芯片技术结合现代计算生物学和材料科学等学科，具有自动化程度高， 检测高灵敏度和高特异性等特点，单次试验获取信息量大等优点。基因芯片药物 筛选通过用药前后基因表达谱的变化找出靶基因及受靶基因调控的基因是否与 药物的作用有相关性‘25-2酣。但是，这种基于表达谱的基因芯片技术也有一定的 局限性。 二．利用酿酒酵母作为模式生物研究固醇代谢 在药物筛选的细胞模型方面，人源性细胞是最接近于药物目标作用环境模 型。然而，人源性细胞培养成本高，对于药物纯度要求高，操作繁琐耗时，筛选 自动化程度低，筛选试验成本也高。 酿酒酵母作为一种已被多年广泛深入研究的真核单细胞生物，具有生长周期 短，培养条件简单，遗传背景清楚等特点。虽然酵母细胞有细胞壁，但细胞壁本 身不能阻止小分子进入细胞，大部分可以进入人体细胞的化合物同样也可以进入 ■ 酵母细胞内。与哺乳动物相似，酵母中的化合物从胞内向胞外的流动并非通过膜 渗透，而是依赖于多向抗药输出蛋白，该蛋白与哺乳动物细胞的复合抗药流出泵 结构相类似。因此，酵母一直是科学家青睐的模式生物【”。1996年lO月，酿酒 酵母基因组DNA全序列测定完成。测序结果表明至少3l％的酿酒酵母基因ORF 和人类的基因有高度同源性Il…， 许多人类疾病相关蛋白在酵母和人体内同样具有氨基酸序列高度相似性。酵 母细胞基因组具有相当优秀的柔韧性，易操作性。酵母细胞的筛选方式有：颜色 ■ 以及药物抗性筛选等。科研人员利用PCR重组阻断法并结合KanMX筛选标记构 建了大量的ORF完全缺失的酿酒酵母菌株。这些ORF相关基因涵盖了涉及癌症， 高血脂和各种遗传病的多个相关领域。Bums等还通过插入lacZ作为报告基因构 建了更多的随机突变菌株【61。这些缺失菌株在酵母基因组研究中发挥了极其重要 的作用，对于药物筛选平台的构建也有着深远的影响。 一种新的降血脂药物筛选技术平台的完善与应用 研究发现，人类和酿酒酵母在固醇合成方面具有高度保守性，前期途径，中 间物基本一致，仅仅最终合成产物不同。脂类合成过程的限速酶蛋白HMG--CoA 还原酶的调控过程在酵母和人类中具有高度保守性[71。虽然酵母合成麦角固醇， 而人类合成胆固醇，但两者在麦角固醇合成之前大部分固醇中前期合成步骤基本 一致。虽然酵母中没有诸如LDL受体或阿朴脂蛋白B的对应同源体，但酵母和人 类在固醇合成，调控，酯化，转化，转运以及相关代谢基因表达和调控序列方面有很 ● 大的相似性【8l。酵母的固醇合成转录调控相关基因和人类中相关基因也是高度 保守的【I”，固醇调控元结合蛋白同源体也已确定。虽然酵母缺乏甾类激素，但 它具有和甾类激素合