小单孢菌产生的抗真菌抗生素.pdfVIP

第一部分小单孢菌的分离、培养及抗真菌活性代谢产物的筛选 材料和方法 1、样品采集 小单孢菌属水生微生物，在江河、湖泊、沼泽等富水环境及其周围分布较多，为 分离得到新菌源，尽量采集生态保持较好、未受破坏的特殊环境下的样品，如森林中 的水流边较潮湿且肥沃的土壤、植物残体丰富的枯枝落叶层的土壤、湖底士、池塘土、 沼泽土，特别是海洋土样以及海洋动植物样品等，从中分离小单胞菌。 采样：预先准备好无菌铝盒或纸袋，贴好标签，记录采样时间、地点、植被(或 生态小生境)，土壤类型等基本数据。采集后的样品尽可能快地进行分离。 2、样品预处理 土样预处理方法： ‘ 1)称取土样39。 三角瓶。 3)置32℃旋转式摇床振荡lO分钟。 4)取出三角瓶土壤悬液，用无菌生理盐水稀释，使其终浓度为lO～、10一、 lO一、10“，待分离。 3、样品分离 i)小单孢菌分离 培养皿中(巾90嘞)，并在培养皿上注明样品样号及稀释度。 (2)将己熔化并冷却至5012左右的分离培养基(已加入选择性抑制剂)约20ml 倒入培养皿中，边倒边摇，使样品悬液与培养基混合均匀，冷却凝固。 分离培养基： A．高氏-天冬素琼脂 可溶性淀粉 2％ L天冬素 0．05％ KN03 O．1％ K2HP04·3H20 O．05％ NaCl O．05％ MgS04·7H20 O．05％ CaC03 O．1％ 琼脂 1．5％ 蒸馏水配制 pH 7．5(消前) B．甘油-天冬素琼脂 L天冬素 O．1％ 甘油 l％ K2HP04·3H20 O．1％ 微量盐溶液· 0．1mYl00ml 琼脂 1．5％ 蒸馏水配制 pn 7．5(消前) ·微量盐溶液： FeS04·7H20 0．19 MnCl2．4H20 0．19 ZnS04·7H20 0．19 蒸馏水 looml C．CV培养基 煤粉(过200目筛) 1．59 VBl 0．5mg VB2 0．5mg VB6 0．5mg 肌醇 0．5mg 6 泛酸钙0．5rag 烟酸0．5rag 对氨基苯钾酸0．5mg 生物素0．25mg 琼脂 159 蒸馏水 1000ml pH 7．5(消前) D．高氏-天冬素一维生素琼脂 高氏一天冬素+cV培养基中的维生素(含量相同) E．淀粉-酵母膏琼脂 淀粉 2％ 酵母膏0．2％