新五丰公司猪口蹄疫免疫程序研究.pdfVIP

月IJ 吾 1研究目的及意义 猪链球菌病是由多种溶血性链球菌引起的猪的一种多型性传染病，该病的临 床特征是急性者表现为出血性败血症和脑炎，慢性者则表现为关节炎、心内膜炎、 淋巴结脓肿。目前已有20多个国家和地区报道有猪链球菌病存在。在我国华南、 西南、华东、江西及江苏等等地曾大面积流行过，近年来由于一些免疫抑制性疾 病的广泛流行，我市猪链球菌病也有逐年上升趋势，给养猪业造成了巨大的经济 损失。因为链球菌的群及血清型较多，而且交叉保护力较差，必须在掌握当地流 行病原菌株血清型的基础上，挑选免疫原性强的代表菌株制备灭活后才能有效的 控制该地区猪链球菌病的发生，本研究结果将为我市制备有效灭活苗提供理论依 据。 2病原学 链球菌种类繁多，在自然界分布广泛，如水、空气、尘埃、乳汁、动物及人 的消化道、呼吸道和泌尿生殖均可存在。其中许多是引起人和动物链球菌病的病 u 原菌。链球菌菌体呈圆形或卵圆形，直径0．6-1．0Illl，可单个成对或以不同长度 的链状方式存在，从4—8个至20一30个茵细胞组成不等，一般无鞭毛，不能运动， 不形成芽孢，有些菌株可形成荚膜，革兰氏染色阳性。多数链球菌为兼氧厌氧菌， 个别为严格厌氧菌，对营养需求比较苛刻，需在培养基中加入血液或血清和葡萄 糖，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子，最适生长温度为37C， 隆起、光滑、半透明的细小菌落，直径为0．5—0．75ram，多数致病菌能形成B型溶 血，少数株菌为a溶血，个别菌落不溶血。在液体培养基中易呈长链，固体培养 基中常呈短链，由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌的链不能无限 制的延长。多数菌株在血清肉汤中培养2—4h易形成透明质酸的荚膜，继续培养后 消失。在液体培养基中形成絮状或颗粒状沉淀，有些菌株则呈现均匀浑浊。 本菌分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、 荤糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触 酶阴性。龙塔等(2004)报道，猪链菌Ⅱ丁发酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、山梨糖、果糖 和麦芽糖，产酸不产气；不能发酵木糖、鼠李糖、甘露醇。猪链球菌主要有三种 抗原成分：(1)核蛋白抗原或称P抗原，无特异性，各种链球菌均相同。(2) 多糖抗原或称C抗原，系群特异性抗原，是细胞壁的多糖组分，可用稀盐酸等 提取。(3)蛋白质抗原或称表面抗原，具有型特异性，位于C抗原外层，其中 可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分，与致病性有关的是M抗原。在过 菌分为20个血清群(A—V，中间缺I和J)。对猪致病的一般为C、L、D、R、S、 T等群。同群同型免疫性高，同群不同型也有交叉免疫，但较为低些。目前报道 的猪链球菌病l型和猪链球菌病2型，其分类方法是根据细菌荚膜多糖抗原的差 异，用协同凝集试验方法将猪链球菌分为35个血清型，即l～34以及1／2，所 谓猪链球1型或2型，即是其中两种。猪链球菌l型为兰氏法S群；猪链球菌2 型为兰氏法R群。目前大多数采荚膜多糖抗原来分类。按链球菌溶血特性又分为 三类：即a、13、Y，B是完全溶血，Q是不完全溶血，Y是不溶血的，引起 猪链球菌病的菌株都是具有乙型(8)溶血性链球菌的特征。 猪链球菌在抵抗力一般不强，60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感，如 2％的石炭酸、0．1％新洁尔灭、1％煤酚皂，均可在3—5min内杀死…。在干燥尘埃中 生存数月。 本菌的致病因子主要有溶血毒素、红斑毒素、肽聚糖多糖复合物内毒素、透 明质酸酶、DNA酶(有扩散感染作用)和NAD酶(有白细胞毒性)等“1。对猪链球菌毒 力因子的研究目前主要用2型菌来进行，包括溶菌酶释放因子(MRP)、细胞外蛋白 因子(EF)、IgG结合蛋白、纤毛粘着素等嗍。依据传统观念荚膜多糖是许多细菌 的致病因子，因此学者们在研究2型猪链球菌时也对其荚膜多糖进行了大量的研 此菌在非免疫动物中不被吞噬“1。Elliot(1978)提纯了此菌的荚膜多糖，经分 析后发现它包含鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、N一乙酰乳糖胺和二唾液酸，分子比 2 糖能与免疫血清立即发生沉淀反应，将其浓度提高至llOOmg／mL也不与异型或 D群抗血清发生反应。并且证明荚膜多糖在猪体内能产生有调理活性的抗体，并 可用弗氏不完全佐剂来提高其免疫源性。Charland等制备了2株荚膜多糖缺失的 变异