新抗钙化方法处理后的生物瓣膜与带瓣血管血液相容性研究.pdfVIP

山西医科大学磺士学位论文 第二章材料处理 2．1材料 屠宰场取牛(2～3岁)的新鲜牛心包和带瓣牛颈静脉。试验用血由阜外心血管病医院血 库提供。 2．2处理过程 屠宰场取牛(2～3岁)的新鲜牛心包和带瓣牛颈静脉，清水漂洗后置冷生理盐水中运回， 24h1为处理。冷PBS冲洗材料上的残留血渍，修剪材料表面的脂肪和多余的疏松结缔组织， 存，备选使用。 经以上方法处理后的牛心包、带瓣牛颈静脉分别置于10％SOB溶液和0．3％单宁酸溶液 中40保存4天后作为试验组，仅经过戊二醛处理者作为对照。 山西医科大学磺士学位论文 第三章试验方法 3．1体外动态凝血试验 采用Nose等人改良的动态凝血时间试验方法[91．将处理前后牛心包片、带瓣牛颈静 脉OcmX 到预定时间后，向烧杯中加蒸馏水50ml，摇晃烧杯10min，吸取上清液用分光光度计在 540nm处测吸光度。每组材料作3个平行实验，取其平均值，作时间一吸光度曲线。 3．2血小板黏附性能试验 参考Tsai等‘嘲法。将处理前后的牛心包片、带瓣牛颈静脉制备成lcmXIon膜片，膜片 X 浸泡于新鲜PBS液中lh后取出，置于24孔细胞培养板中，每一孔中分别加浓度为l109的 戊二醛固定后行扫描电镜(SEM)观察血小板黏附情况。 即为PRP。 3．3溶血试验[111 剪成3份5minx30mm条状，置于试管内，每一试管加生理盐水10m1．阴性对照3管，每管 全部试管每管加稀释兔血0．2ml，轻轻混匀后置于水浴中继续保温60min。倒出各管内液体， 定吸光度并计算溶血率。 3．4 D-二聚体测定 取新鲜全血分装于20个试管中，每管3ml全血，将牛心包片、带瓣牛颈静脉制备成5mm 3000r／min离，1l,30min，取上清血浆用ELISA法测定D．二聚体含量。 3．5补体激活试验 制备lcmXlcrn牛心包片、带瓣牛颈静脉放在细胞培养板孔中，对于同一个献血者(同 一种血浆)每组材料做6个平行样。向放有膜片的板孔中加入lIIIl血浆，并向未放膜片的6个 板孔中也分别加入l 育30min。用ELISA方法对血浆中的补体C3ades Arg进行测定。 山西医科大学焉士学位论文 第四章结果 4．1体外动态凝血试验 型 泉 督 10 20 30 40 50 凝血时问 围1牛心包处理前后凝血时间．吸光度曲线 憾 鬟 螫 lO 20 30 40 50 凝血时间 图．2带瓣牛颈静脉处理前后的凝血时间．吸光度曲线 从图一l可以看出经SOB处理后的牛心包动态凝血时间曲线与戊二醛组相近，没有明显 的急陡向下倾斜。从图一2带瓣牛颈静脉实验组和对照组体外动态凝血时间曲线可以看出单 宁酸处理组带瓣牛颈静脉的动态凝血时间曲线较对照组呈缓慢下倾斜且经历时间长。 4．2血小扳黏附性能试验 血小板黏附试验结果显示：SOB处理的牛心包和戊二醛处理组血小板黏附无显著性差 异，血小板均无明显变形。SEM见图一5．经单宁酸处理带瓣牛颈静脉较戊二醛处理组血小 板黏附少且无明显变形。SEM见图-6。 4．3溶血试验 测得阴性对照吸光度均o．03，阳性对照吸光度均在0．8±0．3范围内，符合要求，