核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测征求意见稿201120.docVIP

GB/T XXXXX GB/T XXXXX—2012 PAGE PAGE II PAGE 1 GB/T XXXXX GB/T XXXXX – 2012 PAGE PAGE 3 GB/T XXXXX—20 GB/T XXXXX—201X 中华人民共和国国家标准 ICS 07 ICS 07.080 B 20/39 核糖 核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测 Determination of the purity of ribonuclease and desoxyribonuclease （征求意见稿） 发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会201X-XX-XX 发布 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 201X-XX-XX 发布 201X-XX-XX实施 GB/T ××××—201× 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：。 本标准主要起草人：。 GB/T ××××—201× PAGE 3 核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测 1 范围 本标准规定了核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶纯度检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶产品的生产、监督和检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核糖核酸酶（ribonuclease，RNase） 水解核糖核酸（RNA）中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸核酸的核酸酶。根据酶作用的位置不同，可进一步分为内切核糖核酸酶与外切核糖核酸酶。 3.2 脱氧核糖核酸酶（deoxyribonuclease，DNase） 水解脱氧核糖核酸（DNA）中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酶。根据酶作用的位置不同，可分为内切脱氧核糖核酸酶与外切脱氧核糖核酸酶。 4 原理 在一定浓度的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）中分离分子量不同的蛋白质，并用考马斯亮蓝（CBB）染色，成像后进行核酸酶的纯度检测。 5 仪器设备及器具 5.1 电泳系统。 5.2 凝胶扫描装置。 5.3 水平脱色摇床，转速45 rpm/min。 5.4 电子天平：精度为0.0001 g和0.01 g。 6 主要试剂 本方法所用试剂均为分析纯，实验用水均为GB/T 6882规定的二级水。 6.1 30%（w/v）亚甲基双丙烯酰胺溶液（Acr-Bis） 取丙烯酰胺29.00 g，N，N’-甲叉双丙烯酰胺1.00 g，加入60 mL水，充分搅拌溶解，定容到100 mL。用0.45 μm微孔滤膜过滤除菌和杂质后储于棕色瓶，4 ℃避光保存。如有沉淀应过滤，两个月后溶液应重新配制备用。 6.2 0.5 mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液（Tris-HCl），pH 6.8 取6.06 g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶于80 mL的水中，充分搅拌溶解，用HCl调pH值为6.8，定容至100 mL，室温保存备用。 6.3 1.5 mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液（Tris-HCl），pH 8.8 取18.17 g 三羟甲基氨基甲烷溶于80 mL的水中，充分搅拌溶解，用HCl调pH值为8.8，定容至100 mL，室温保存备用。 6.4 10%（w/v）十二烷基磺酸钠（SDS）溶液 取2.00 g 十二烷基磺酸钠溶于约16 mL的水中，超声溶解后定容至20 mL，室温保存备用。 6.5 10%（w/v）过硫酸铵（APS）溶液 取0.10 g过硫酸铵于1.5 mL离心管，加1 mL水溶解，现配现用。 6.6 10倍Tris-甘氨酸电极缓冲液 取30.00 g Tris、144.00 g甘氨酸、10.00 g SDS溶于800 mL水中，定容至1 L，室温保存，使用时稀释10倍。 6.7 5倍十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）加样缓冲液 取1.25 mL 1 mol/L Tris-HCl（pH 6.8）、SDS0.50 g、2.5 mL甘油、25.0 mg溴酚蓝，用水溶解定容至5 mL，按照每管500 μL分装后，4 ℃冰箱保存备用。临用前每管加0.0780 g二硫苏糖醇（DTT），现配现用。 6.8 染色液 染色液A：考马斯亮蓝G-250 0.10 g、乙醇50 mL、85%（m/v）磷酸25 mL