汉防己甲素逆转新新肺癌化疗耐药跟凋亡抗性的实验研究探究 .pdf

新中医 2006年6月 第38卷第6期 ·90. NEW JOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE June 2006Vol.38No.6 [文章编号10256一7415(2006)06一0090一02 汉防已甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实验研究 徐萌，周蓓 (暨南大学 附属第一医院肿瘤科，广东广州510630) 摘【要】目的:研究中药汉防己提取的生物碱汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药产生与凋亡发生的机理。方法:实验分对照组(只 加培养基)和阿霉素组(ADR组)、汉防己甲素合阿霉素组(Tet/ADR组)，后2组采用不同浓度汉防己甲素和阿霉素作用于人肺癌 敏感株GLC-82和阿霉素耐药株GLC-82/ADR细胞，通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用，流式细胞仪检测多药耐药相关 蛋白(MRP)表达，碘化丙iz(PI)染色检测细胞凋亡。结果:GLC-82/ADR耐药肺癌细胞株耐药指数(RF)为5.43，说明耐药株肺 癌细胞对阿霉素明显耐药;汉防己甲素作用耐药肺癌细胞后其RF降至1.89，说明汉防己甲素可以逆转GLC-82/ADR耐药肺癌 细胞对阿霉素的耐药。化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达在12h,24h,36h,48h,ADR组与Tet/ADR组比较，差异有非常显著性 意义(P0.01)，说明汉防己甲素可以下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达。化疗耐药肺癌细胞凋亡在6h,12h,18h,24h, Tet/ADR组与ADR组、对照组比较，差异有非常显著性意义(P0.01)，说明汉防己甲素协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋 亡作用。结论:汉防己甲素可以逆转GLC-82/ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药，下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达，协同 阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。 【关键词】汉防己甲素;肺肿瘤;多药耐药相关蛋白;细胞凋亡 【中图分类号】R285.6 1文献标识码】A 肺癌在我国大中城市的发病率及死亡率均居癌症首位，化 103/mL，待细胞处于对数生长期时，加人不同处理因素后进 疗在肺癌综合治疗中的作用 日益受到重视川，多药耐药 行检测。实验分3组:对照组、阿霉素组(ADR组)和汉防己 (Multidrugresistance,MDR)的产生是导致肺癌化疗失败的主要 甲素合阿霉素组(Tet/ADR组)。 原因，目前应尽快解决肺癌化疗耐药性。研究表明中药汉防己 1.3 M一法检侧杭肿瘤药物的细胞毒作用 肺癌细胞接种 提取的生物碱汉防己甲素对肺癌有明显抑制作用，本研究进一 于96孔板培养24h后，对照组只加培养基，ADR组与Tet/ 步阐明汉防己甲素逆转肺癌耐药和凋亡抗性的机理，加深了解 ADR组分别加人不同浓度的ADR和Tet，分组继续培养48h, 汉防己甲素对耐药细胞凋亡调控，为今后开辟汉防己甲素逆转 弃除上清液，每孔加入2mg/mL四氮哇蓝(MTT)，继续培养 耐药研究提供新手段。 6h，加人二甲亚矾(DMSO)，以570nm为检测波长，在DR- 1 材料与方法 MA960型酶标仪检测各孔的的光密度(OD)值，根据公式计算 1.1 试剂 汉防己甲素(Tetrandrine,Tet):西安三新生物技 抑制率:抑制率(%)=(1一实验孔平均OD值/对照孔平均OD 术研究所产品;RPM1一1640培养基:美国Gibe。公司提供; 值)x100%。采用直线回归法推算药物作用的50%抑制浓度 新生牛血清:中国杭州四季青生物工程材料有限公司提供;阿 (ICso)。 霉素(ADR):澳大利亚PharmaciaUpjohn药厂产品;鼠抗人 1.4 流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白(MRP)表达 肺癌细 MRP单克隆抗体QCR一1:美国DOKO公司产品。 胞处于对数生长期时，分别于加人ADR和Tet后24h,48h, 1.2 细胞培养与分组 人肺癌敏感株GLC-82和阿霉素耐 72h,96h收集细胞，经0.25%胰酶消化后收集细胞，分别加 药株GLC一82/ADR细胞在体外用