细菌生长繁殖及培养.pptVIP

刘潇 第九章 细菌的生长繁殖与培养 知识要点 细菌的生长繁殖 细菌的人工培养 * 学习目标 掌握细菌生长繁殖的条件、繁殖方式及速度； 熟悉细菌在培养基中的生长现象及意义； 熟悉细菌的代谢产物及意义。 前 言 细菌是一大类具有独立生命活动的单细胞微生物，能从外界环境中摄取营养物质，合成自身细胞成分并获得能量，同时不断排出废物，完成新陈代谢，得以生长繁殖。细菌的生长繁殖与环境条件密切相关，条件适宜时，细菌的生长繁殖及代谢旺盛，改变条件时可使细菌生命活动受到抑制或使细菌死亡。 占细胞总重量80% 蛋白质、糖类、脂类、无机盐等； 15-20% 肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、脂多糖 二氨基庚二酸、吡啶二羧酸、2-酮基-3-脱氧辛酸 水： 固体成分： 特有成分： 第一节 细菌的生长繁殖 一、细菌的化学组成 （一）营养物质 1. 水 2. 碳源: co2、碳酸盐、糖、脂肪 3. 氮源: 有机氮、无机氮、游离氮 4. 无机盐: K、Ca、Na、Mg、S、P等 5. 生长因子(growth factor)： 某些细菌生长所必需而又不能自身合成的有机化合物。 种类：B族维生素—— 硫胺素、核黄素、生物素、泛酸 某些必须氨基酸 嘌呤、嘧啶、胆碱 Ⅴ因子、Ⅹ因子 二、细菌生长繁殖的条件（重点） （二）酸碱度 大多数病原菌：pH7.2～pH7.6。 霍乱弧菌：pH8.4～pH9.2 结核分枝杆菌：pH6.5～pH6.8 （三）温度 大多数病原菌：37℃ （四）气体 ① O2：专性需氧菌：有氧条件 微需氧菌：低氧压(5-6%)，＞10%抑制 专性厌氧菌：无氧条件 兼性厌氧菌：有氧或无氧，多数致病菌属于此类 ② CO2：5% -10% CO2 （一）细菌个体的生长繁殖 方式：无性二分裂 速度：20～30分钟/代 结核分枝杆菌18～20小时/代 三、细菌生长繁殖的规律 （二）细菌群体的生长繁殖 细菌生长曲线 小时 细菌数目的对数 迟缓期(lag phase) 最初培养1-4小时，菌体不分裂，但菌体增大、代谢活跃 对数期(logarithmic phase) 一般持续6-8小时。活菌数目呈对数直线上升。 细菌形态、染色、生理活性典型，对外界环境敏感 稳定期(stationary phase) 细菌繁殖数与死亡数接近。 细菌形态、染色、生理活性改变，产生外毒素、抗生素、芽孢 衰退期( decline phase) 死亡数超过活菌数。细菌变长、肿胀、畸形、自溶 细菌生长曲线特点 四、细菌的代谢产物及意义 根据细菌具有不同的酶， 对糖、蛋白质分解能力 及分解后产生的产物不同用生化方法来鉴定细菌 称：细菌的生化反应 1. 糖发酵试验 机理：葡萄糖 HCOOH CO2+H2 方法：肉汤培养基（pH7.4）+ 葡萄糖 酚红 红色培养基 空白对照 大 肠 杆 菌 痢 疾 杆 菌 37℃，培养18-24h （一）分解代谢产物及生化反应 脱氢酶 2. VP(Voges-Proskauer)试验 由Voges和Proskauer两学者创建，故名。 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 强碱+氧气 双乙酰 V-P阳性 产气杆菌 脱羧 分解 红色化合物 α萘酚 肌 酸 肌 酐 大肠杆菌 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 × × 葡萄糖 蛋白胨 培养基 VP试验 阴性 阳性 产气杆菌 大肠杆菌 3. 甲基红试验（methyl red test，MR） 机理： 大肠杆菌 产气杆菌 葡萄糖 乳 糖 PH＜4.5 PH＞5.4 甲基红指示 剂呈红色 甲基红指示 剂呈桔黄色 甲基红试 验阳性 甲基红试 验阴性 丙酮酸 中性产物 脱羧 丙酮酸 机理：产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分 解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，同时分解培养 基中的铵盐生成氨，使培养基由中性变为碱性，含溴麝 香草酚蓝（BTB）指示剂的培养