自诱导培养基-天恩泽.pdf

CAT#: 100825-200 天 常温运输和保存 净 沙 系 列 自诱导培养基 Auto-induction Medium 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 本产品是本产品是在pET 专用生长培养基的基础上开发而成的，它利用 E.coli 自身对培养基中不同碳源的调控利用机制，实现外源蛋白在细菌达到 饱和生长期后的自动诱发。本产品具有下列特点： 1. 本产品自动诱导表达，不需要添加任何IPTG 或相关诱导物，节约成本。 2. 免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。 3. 极大将细菌的生长密度OD600 从2 左右提高20 以上。 4. 极大提高外源蛋白的表达量，最高可占细菌总蛋白的45%。 5. 与各种细胞培养容器（如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等）兼容。 6. 本产品即开即用，非常方便。 7. 适用于T7 RNA 聚合酶基因由lac 启动子控制的任何表达系统，如pET 系列。 8. 不适用于lacZ 或lacY 突变的宿主菌。 规格及成分 成 份 编 号 200mL 立盒包装 成份A 100825A 200 mL 成份B 100825B 1.25 mL 使用手册 100825sc 1 份 运输及保存 常温运输及保存，有效期两年。 自备试剂 蒸馏水 使用方法 一：培养基的配制 1. 配制自诱导培养基：将 1.25 mL 溶液B 全部加入到200 mL 的溶液A 中即得自诱导培养基。注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非 常容易长细菌。 2. 贴好标签待用。如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。 二：培养基的使用 1. 将构建好的质粒转化入细菌，如BL21 （DE3），涂于自备的、含有 1% 葡萄糖的LB 培养基中（需要加入适当浓度的抗菌素），37℃培养过夜。 2. 挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体LB 培养基中， 37℃培养直到菌液浑浊但不饱和（一般需要6-8 小时）。 3. 将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中（如果自诱导培养 基体积是 100 mL ，则加入100uL 菌液），同时加入适当的抗菌素。注 意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基 高，需要 100ug/mL 。由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气， 因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底最好是皱褶式 的，这样摇晃中氧气供应更充分。 4. 37℃培养过夜，或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度（对 温度诱导型启动子）。 5. 收