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酶膜生物反应器中酶的固定化方法研究及其应用进展 310 药物生物技术 PharmaceuticalBiotechnology2006,13(4):310~314 酶膜生物反应器中酶的固定化方法研究及其应用进展 石陆娥,应国清,唐振兴,易喻,熊文悦 (1.浙江工业大学化材学院博,杭州310014;2.浙江工业大学药学院,杭州310014) 摘要利用膜作为固定化酶载体的酶膜反应器,能有效地将酶固定,可实现产物的原位分离,消除位阻效 应和抑制效应,且可连续操作,便于放大,已广泛应用于蛋白质,纤维素,淀粉等的酶解,污水处理等.文章对酶 膜反应器中的固定化方法研究进行了分类,介绍并综合了酶膜反应器的应用,及存在问题.对其前景做了展望. 关键词固定化酶;酶膜反应器;膜分离 中图分类号:Q814文献标识码:A文章编号:1005—8915(2006)04—0310—05 酶作为生物催化剂,已广泛用于制药,食品,生化行 业.而其有效性和经济性在很大程度上取决于酶与反应 物的接触方式和能否以恰当的方法将酶与产物分开.吸 附,包埋,共价交联,微束等固定化酶技术的迅速发展,改 变了酶工程学的面貌 近几十年来,膜分离技术已经渗透到生物化工领域,它 不仅能有效地对酶,蛋白质,生物制品等进行分离,浓缩和纯 化,还能利用膜作为固定化酶的载体,实现酶的膜固定化. 传统意义上的膜固定化酶反应器,通常是将一种不能透过高 分子化合物的分离膜置入容器中,然后加入酶及底物,使其 进行酶反应,其反应生成物会连续不断地透过分离膜,而被 回收利用.这种酶虽然也被称为固定化酶,但因酶和膜相对 独立,酶和膜的特征实质没有改变,因而酶在游离态时的一 些缺陷如稳定性差,使用寿命短等并未得到改善.目前随着 酶固定化技术和水平的提高,膜科学技术和工业的不断发 展,各种膜固定化酶反应器不断涌现,其克服了游离酶膜反 应器的缺点,成为目前酶工程领域的研究热点.国际已开始 用以生产卜天冬氨酸,卜苹果酸,氨基青霉烷酸,酒精等.国 内对酶膜反应器的研究刚刚起步.它的研究开发将有助于 推动我国酶工程学的发展. 1酶膜反应器中酶的固定化方法 随着膜固定化技术的发展,特别是当半透膜除了用于 分离外,还被用作界面催化剂的载体制各膜固定酶时,酶 膜反应器的功能得到了拓展,因为在反应体系中多了一个 固定相,可以进行更复杂的酶反应,例如可以实现多相酶 反应体系将酶固定在膜上的方法有物理吸附法,化学交 联法,共价结合法,定点固定化等. 1.1物理吸附法(凝胶层固定化) 膜(或经适当处理过的膜)对膜蛋白有较强的吸附作 用,借助膜的这种特性 将酶溶液在膜反应器中循环一定时间后便可实现酶 的固定化.酶溶液进行膜过滤后,因浓差极化而在膜表面 形成一薄层酶蛋白凝胶层,这也属于吸附法固定酶的一种 方法(动态固定化).或者酶被无催化活性的蛋白质包围 在膜表面形成凝胶层,这种方法称为共凝胶化固定法(静 态固定化).这种固定化法由于酶处于微细环境中,十分 稳定,酶的失活较小,并且胶层内酶浓度较高,因而反应物 的转化率也较高.但缺点是膜易被堵住.此法关键是选 择有适当的截留分子量的超滤膜和膜组件构型.这种反 应器的应用见表l. 表1凝胶酶膜反应器『1] 酶反应物及用途 酸性磷酸酶 卢一葡糖苷酶 卢一葡糖苷酶 一 半乳糖脱氢酶 蔗糖酶 苹果酶 脂肪酶 脲酶 变构酶 青霉素酰化酶 磷酸4一硝基苯脂水解 纤维素二糖水解为葡萄糖 4一硝基苯基葡糖苷 D一半乳糖的氧化 蔗糖 L一苹果酸转化为丙酮酸 脂肪水解 尿素分解 CMP的氨基水解 青霉素除去侧链成6一APA 收稿日期:2006—04—21修回日期:2006—05—21 基金项目:浙江省科技厅资助项目(2005C33004) 作者简介:石陆娥,女,1979年9月生,浙江新昌人,博士生,从事酶的固定化,分离纯化等的研究. * 通讯联系人:email:gg坠g!::塑联系电话:0571802 石陆娥等:酶膜生物反应器中酶的固定化方法研究及其应用进展311 1.2化学交联法 膜材料上不存在反应基团时,通过双功能或多功能试 剂的架桥作用,使酶与功能试剂形成共价键而实现酶固定 化.常用的试剂有戊二醛,双重氮苯胺和乙烯一马来酸酐 共聚物等.主要步骤是:1)用硅烷化试剂活化膜:2)用双功 能试剂与活化后的膜反应:3)在低温下把酶固定在膜上. 其应用见表2. 表2交联酶(均以戊二醛为交联剂)[1. 膜材料酶 丝素 丝素 丝蛋白 醋酸纤维素 鸡蛋白 聚碳酸脂 PVC一硅石 甲基丙烯酸甲酯一二甲基丙烯酸乙酯 糖化酶 卢一葡萄糖糖苷酶 葡萄糖氧化酶 胆固醇氧化酶 葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶 a～淀粉酶 胰脂肪酶 1.3共价偶联法 膜表面含有活性基团时,酶与基团以共价键方式结 合,从而实现酶的固