髓染色体检测标准操作规程.docVIP

迪安医学检验中心 迪安医学检验中心 作业指导书 文件编号：DA-SOP-OMS1-009 版本号： 第 4 版 第0 次修订 主题：骨髓染色体检测标准操作规程 生效日期：2009 年 4 月 1 日 页 码： 第 PAGE 5 页 共 NUMPAGES 5 页 目的 规范染色体室外周血染色体检查实验操作，保证骨髓染色体检查分析工作的顺利进行。 实验原理 利用不含PHA等多克隆免疫细胞激活剂的细胞培养基实现经无菌采集的骨髓标本的细胞增殖，并通过秋水仙素使细胞分裂停止于中期，低渗处理使有核细胞膨胀后进行滴片固定获得分散的染色体，本实验室采用传统G显带技术即通过胰酶消化、Giemsa染色体的方法显示染色体带纹，分析染色体的结构和数量来判断染色体核型。 3.适用系统 3.1人员：适用于所有进行骨髓染色体检查分析技术人员； 3.2仪器：染色体核型分析系统； 电子显微镜(OLYMPUS BX51、BX41、CX21) 试剂 4.1成品试剂 4.1.1 天津瑞爱金生物科技有限公司 骨髓培养基（规格：5mL/瓶）； 4.1.2 衢州巨化试剂有限公司 甲醇（规格：500mL/瓶 分析纯）； 4.1.3 杭州化学试剂有限公司 冰乙酸（规格：500mL/瓶 分析纯）； 4.1.4 湖州湖试化学试剂有限公司 磷酸氢二钠（规格：500g/瓶 分析纯）； 4.1.5 湖州湖试化学试剂有限公司 磷酸二氢钾（规格：500g/瓶 分析纯）； 4.1.6 宁波化学试剂有限公司 氯化钾 （规格：500g/瓶 分析纯）。 4.2 自配制试剂 参考SOP外周血染色体检查标准操作规程4.2。 保存条件 骨髓培养基保存于-20℃冷冻环境，甲醇常温保存于避光处，其余成品试剂常温保存；自配制试剂保存条件参考SOP外周血染色体检查标准操作规程4.2 5.标本要求 5.1 标本类型：无菌穿刺采集的骨髓。 5.2 标本采集:骨髓标本使用中心配送的真空肝素钠抗凝管（BD公司）和采血针进行无菌采集，采集后立即轻轻颠倒充分混匀，以免凝血。 5.3 标本验收:有溶血、凝血现象、经冷冻、高温环境中放置或接收时距标本采集时间超过4小时的标本视为不合格标本。 5.4 标本储存：常温18-28℃ 5.5 标本接收： 5.5.1 样本室接收染色体标本。 5.5.2 核对申请单上的各项内容是否均填写完整，尤其是姓名、年龄、性别、临床病史、临床诊断、 采集时间等，对填写不完整的申请单，应及时和客服交接，由客服及时联系客户，补充缺项。并同时检查标 本是否符合要求（见5.2标本验收），对不符合要求的标本，及时退还，并填写退单通知单。 5.6 标本的处理：接种完标本，剩余标本即丢弃。 6.操作步骤 6.1 骨髓细胞培养 6.1.1 所有标本需在标本到达实验室2小时内接种，接种前30分钟，从－20℃冰箱中按照标本量取出培养基于37 6.1.2 接种前轻轻颠倒混匀待接种的标本10次，再次观察标本是否有血凝块，溶血等，对不合格标本按相关文件进行处理。 6.1.3 接种前将接种瓶外包装打开，并用75%酒精擦拭消毒橡皮塞部位。 6.1.4 将标本采集管顶部用75%酒精擦拭消毒，用2.5mL针筒抽取采集管内的血样1.3mL，注入培养基中，每瓶0.6-0.1.5mL （视白细胞计数可进行适当调整），轻轻摇晃培养瓶，观察是否有血凝块。在培养瓶上贴上与标本及申请单上相同的标本编号标签，标签内容为： sample type-年月日及流水号，如BM-080801-01（BM表示骨髓）。 6.1.5 所有标本接种完毕后，轻轻摇匀培养基，并将培养瓶置于37℃ 6.1.6 剩余标本丢弃。 6.1.7 培养时间：24-48小时培养。 6.1.8 将原始申请单信息输入核型分析软件中。 6.2 骨髓细胞收获 6.2.1 经增殖培养24小时后，去掉培养瓶盖，每瓶加入20ug/mL的秋水仙素200uL，轻轻摇晃后重新置37℃培养箱孵育1小时，使细胞分裂静止在中期， 6.2.2 37℃ 6.2.3 将加秋水仙素后的细胞培养基移入15mL尖底离心管中，2份培养标本分开进行，各收获一管。并在各离心管上写上相应标本编号。 室温1000rpm×10分钟，管底可见红色细胞沉淀，吸去黄色上清液。 6.2.4 加入8-10mL预热的0.075mol/L KCl低渗液，用滴管充分打匀，于37℃水浴箱中低渗40分钟，并进行 6.2.5 预固定：直接在低渗后的细胞悬液中缓慢加入2mL新鲜配制的固定液（甲醇：冰醋酸＝3:1），轻轻混匀细胞，吹气法吹打4-9次后，1000rpm×10分钟，离心后倾去上清，注意不要倒掉细胞沉淀。 6.2.6 第一次固定