GB/T 24863-2010畜禽细胞体外培养与冷冻保存技术规程.pdf

ICS 65. 020. 30 B 40 OB 中华人民共和国国家标准 GB/T 24863—2010 畜禽细胞体外培养与 冷冻保存技术规程 Technical regulation of farm animals cell culture and cryopreservation 2010-06-30 发布 2011-01-01 实 发布 GB/T 24863—2010 -LX- 刖 5 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归口。 本标准起草单位 ：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：关伟军、马月辉、李向臣、李跆、闫雷、赵倩君、宫雪莲。 I GB/T 24863—2010 畜禽细胞体外培养与 冷冻保存技术规程 1范围 本标准规定了畜禽体细胞保存方法。 本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽细胞体外培养与保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注日期的引用文件 ，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 体细胞体外培养 i" somatic ce culture 将体细胞在模拟体内生存环境的体外条件中进行培养，使细胞生长增殖，并保留其完整结构和功能 特性的方法。 3.2 原代细胞培养 primary ce culture 将体细胞在模拟体内生存环境中进行培养，使细胞生长增殖达到可传代状态的培养方法。 3. 3 细胞冷冻保存 ce cryopreservation 将体外培养细胞与冻存液按一定比例混匀后 ，按设定的降温速率降温，使其于液氮中长期保存的 过程。 4工作区条件 工作区一般要由准备室、缓冲间、无菌室、细胞保存室组成。 其中，缓冲间面积应不小于3 m2,并设有更衣柜和紫外灯 ，紫外灯的强度为不少于1.5 W/n? 。紫 外线灯管距地面不应超过2. 5 m,每次照射时间为20 min 〜30 min 。无菌室无菌等级的最低标准应达 到万级。 5主要仪器、设备 超净工作台、冰箱、鼓风干燥箱、高压蒸汽消毒器、液氮生物容器、离心机、电子天平、C()2培养箱、 超纯水装置和显微镜等。 6清洗与消毒 6. 1玻璃器皿清洗与消毒 6. 1. 1浸泡 所需的玻璃器皿在含有洗涤剂的清水中浸泡12 h0 1 GB/T 24863—2010 6. 1.2刷洗 选软毛毛刷，反复洗刷后用清水冲洗3次，三蒸水冲洗3