课件：免疫组化与杂交组化.ppt

⑥扩大培养 有两种途径，一是体外培养，其优点是可大量生产，缺点是培养上清液中单抗含量低，仅5-40μg/ml，而且培养液中常含血清，纯化带来麻烦，而且长期培养污染不易控制； 二是体内方法，即在小鼠腹腔接种杂交瘤细胞，方法是先用石蜡油腹腔注射以刺激腹水产生，七天后，在腹腔中接种地107的细胞（细胞密度最好在2×107/ml）。体内方法的优点是单抗的浓度高，可达10mg/ml腹水，还可定期、持续抽取腹水，并不易污染，缺点是一旦小鼠死亡或患病，将一无所得。 ⑶基因工程抗体的特点和制备 基因工程抗体又称重组抗体，它是在充分认识Ig基因结构与功能基础上，应用DNA重组技术和蛋白质工程技术，按照客观需求在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。特点是既保留了天然免疫抗体的特异性和主要生物学活性，并去除或减少了无关结构。 6.抗体的纯化 抗体所在的抗血清、腹水或培养液中，其它成分甚多，如要标记抗体时，必须提纯抗体，以免受杂蛋白的干扰。用不同的方法，可得到不同纯度的抗体：中性盐盐析法只能得到粗的IgG；离子交换层析法（DEAE-52）可得到较纯的IgG组分； 一般来说，抗体试剂的纯度可按以下制剂顺序逐步递增：全血清或腹水-γ球蛋白-IgG（粗提- 细提）-特异性抗体（免疫纯IgG）-特异性抗体片段（Fab或F（ab′）2）