课件：免疫组化060614.ppt

邻苯二胺(OPD)和四甲基联苯胺(TMB)在ELISA中最常用 OPD需避光保存，应用液常在数小时内自然产生黄色，应现用现配。反应产物为黄色。用酸终止反应后仍为黄色。在492nm波长处有最大吸收。 TMB对光敏感性差，应用液可放置较长时间，反应产物为蓝绿色。用酸终止后变为金黄色。在450nm波长处有最大吸收。 DAB在组织切片中常用 DAB本身无色，反应后呈棕色，不溶于水，不易褪色，电子密度高，最为常用。 目前已经有商品化的试剂盒，使用起来非常方便。 (2) 碱性磷酸酶(AP)及底物 AP为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色： 偶氮偶联反应：底物为?-萘酚磷酸盐，经水解后得?-萘酚，与重氮化合物如坚牢蓝(fast blue)或坚牢红(fast red)形成不溶性沉淀，分别呈兰色或红色。 靛蓝-四唑反应：底物为溴氯羟吲哚磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-indodyl phosphate,BCIP)，经酶水解并氧化形成靛蓝，而氮蓝四唑(NBT)在此氧化过程中被还原成不溶性紫兰色沉淀。 又分为以下两种方法： 酶标抗体法 直接法 间接法 非标记抗体酶法 酶桥法 PAP法 3、免疫酶标染色方法 (1) 酶标抗体法 通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。 优点：切片能长期保存、反复