课件：免疫组化suden.ppt

(2) 碱性磷酸酶(AP)及底物 AP为磷酸酯的水解酶，可通过两种反应显色： 偶氮偶联反应：底物为?-萘酚磷酸盐，经水解后得?-萘酚，与重氮化合物如坚牢蓝(fast blue)或坚牢红(fast red)形成不溶性沉淀，分别呈兰色或红色。 靛蓝-四唑反应：底物为溴氯羟吲哚磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-indodyl phosphate,BCIP)，经酶水解并氧化形成靛蓝，而氮蓝四唑(NBT)在此氧化过程中被还原成不溶性紫兰色沉淀。 又分为以下两种方法： 酶标抗体法 直接法 间接法 非标记抗体酶法 酶桥法 PAP法 3、免疫酶标染色方法 (1) 酶标抗体法 通过共价键将酶结合在抗体上，制成酶标抗体，再用酶组化法将酶显色，使之生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，以供光镜和电镜观察。 优点：切片能长期保存、反复观察，适于镜下半定量分析。 缺点：酶与抗体形成的共价键，可损害抗体和酶的活性；易产生非特异染色。 (1) 酶标抗体法——直接法 ? 将酶直接标记在一抗上，然后直接与相应抗原特异地结合，形成抗原-抗体-酶复合物，最后用底物显色剂显色。 Ab-HRP 直接法 (1) 酶标抗体法——间接法 将酶标记在二抗上，先将一抗与相应的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色。