课件：免疫组化免疫荧光流式细胞术的应用比较及常见问题分析.pptVIP

2.信号弱或无信号 无目的蛋白或表达量极少，建议选用表达量高的细胞或组织。 细胞通透性差，建议增加通透剂的作用时间或浓度。 一抗/二抗浓度太低，建议增大其浓度。 二抗选择错误（种属不匹配），建议选用与一抗种属相匹配的二抗。 1.背景过高 一抗质量不高，建议使用特异性高、效价高的一抗。 一抗/二抗浓度太高，建议降低一抗/二抗浓度。 封闭不完全，建议增加蛋白封闭时间。 洗涤不充分，建议增加冲洗次数与时间。 可通过调节荧光显微镜的参数来减低背景。 3.荧光猝灭快 荧光素本身特性决定，光稳定性差，建议选用光稳定性好的荧光素二抗。 用普通的封片剂封片，建议选用防荧光猝灭剂封片。 免疫荧光常见问题分析 4.细胞有自发荧光 使用了戊二醛固定，建议在固定后荧光染色前进行荧光淬灭，如使用NaIO4，NaBH4，甘氨酸等，染色前检查自发荧光。 材料本身（如石蜡）有自发荧光，建议设立阴性对照，通过降低荧光显微镜的参数来消除背景染色。? 细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量高；培养细胞中死细胞／活细胞比例高； 流式细胞术定义及原理 流式细胞仪（FLOW CYTOMETOR）： 进行流式细胞分析的仪器，是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，抗体技术为一体的高科技细胞分析仪。 流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）: 利用流式细胞仪对