课件：免疫组化实验方法.pptVIP

可编辑 可编辑 免疫组化实验方法 免疫组织化学的概念 利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。 * 最突出的优点 在更广阔的范围内，把结构与功能及代谢结合起来，在微观世界原位地确定组织及细胞结构的化学成分，达到方法统一，定性可靠，定位准确，定量可能。 * 免疫组化实验标本 组织标本（石蜡切片和冰冻切片） 细胞标本（组织印片、细胞爬片和细胞涂片）。 石蜡切片对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档； * 细胞和组织的固定 1．固定的作用--使细胞内蛋白质凝固、终止或抑制外源性和内源性酶活性，最大限度地保存细胞和组织的抗原性，使水溶性抗原转变为非水溶性抗原，防止抗原弥散。 2．选择最佳固定液的标准：保持组织形态结构；保存抗原性。 （1）醛类固定剂：穿透性较强，收缩性小，是常用的固定剂。如10％中性福尔马林液、4％多聚甲醛缓冲液、戊二醛-甲醛液、乙酸-甲醛液等。 （2）非醛类固定剂：适用于多肽类激素的组织固定，常与戊二醛或多聚甲醛混合使用。 （3）丙酸及醇类固定剂：沉淀蛋白质和糖，保存抗原性较好。但对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质的保存效果较差，和其它试剂混合使用加以解决，如加冰乙酸、乙醚、氯仿、甲