转基因耐除草剂大豆GTS4032及其衍生品种定量检测实时荧光PCR方法.pdfVIP

ICS 67.050 B 23 DB12 天 津 市 地 方 标 准 DB 12/T 651—2016 转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2 及其衍生品种 定量检测 实时荧光PCR 方法 Detection of genetically modified plants and derived products— Quanlitative PCR method for herbicide-resistant soybean GTS 40-3-2 and its derivates 2016-09-27 发布 2016-11-01 实施 天津市市场和质量监督管理委员会发布 DB 12/T 651—2016 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由天津市农村工作委员会提出。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天 津市质量技术监督宝坻检测中心。 本标准主要起草人：兰青阔、宛煜嵩、杨炳存、赵新、李亮、陈锐、朱珠、刘娜、王成、徐石勇。 本标准20 16 年9 月首次发布。 I DB 12/T 651—2016 转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2 及其衍生品种定量检测 实时荧光PCR 方法 1 范围 本标准规定了转基因耐除草剂大豆GTS 40-3-2 转化体特异性定量PCR 检测方法的术语和定义、 检测方法、结果计算。 本标准适用于转基因耐除草剂大豆GTS 40-3-2 及其衍生品种，以及制品中GTS 40-3-2 转化体的 定量PCR 检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求 农业部1485 号公告—4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 农业部2031 号公告—19—2013 转基因植物及其产品检测 抽样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 Lectin 基因 Lectin gene 编码大豆凝集素的基因。 3.2 GTS 40-3-2 转化体特异性序列 event-specific sequence of GTS 40-3-2 GTS 40-3-2 外源插入片段5′端与大豆基因组的连接区序列，包括35S 启动子部分序列和大豆基因 组的部分序列。 4 原理 根据大豆外源基因和内标基因特异性序列设计引物和TaqMan 荧光探针，对标准样品和试样同时 进行实时荧光PCR 扩增。根据标准样品模板拷贝数与Ct 值间的线性关系，分别绘制外源基因和内标 基因的标准曲线。计算试样中外源基因和内标基因的拷贝数及其比值。 5 检测方法 5.1 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T 6682 规定的一级水。 5.1.1 TaqMan 荧光PCR 反应试剂盒。 1