课件：免疫组化幻灯教学版.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 标记抗体法 不标记抗体法 常用的免疫酶组织化学方法 免疫酶组织化学常用的酶 理想的标记酶的要求 酶的活性高且稳定 终产物稳定，不扩散，有良好的定位 酶和抗体的结合不影响抗原和抗体的结合 在组织中和体液中不存在内源性的酶及其底物 应用最多的标记酶 辣根过氧化物酶（HRP） 稳定性好，在PH3.5～12范围, 60℃加热15分钟不失活 穿透性强，溶解度大. 底物为H2O2，DAB（3′，3-二氨基联苯胺）为供氢体,反应式为： HRP. H2O2 +DH2 HRP+D+2H2O 碱性磷酸酶（AP） ABC三步法(亲和素-生物素-过氧化物酶连结法)  ABC法是利用亲和素（卵白素）与生物素特有的高度亲和力这一生物学性质,先将生物素与辣根过氧化酶（HRP）结合，形成生物素化HRP(B液)，然后与亲和素(A液)按一定的比例混合，形成ABC复合物。用生物素化的二抗与一抗结合，再与ABC复合物结合，最后用底物显色剂显色。 ABC 复合物 A液——亲和素液 B液——与生物素结合的过氧化物酶溶液 ABC 复合物 ABC 法 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 优点： 敏感性高，约为PAP法的8-40倍； 特异性强，非特异性背景着色低