禾谷类花粉组培综述.pptVIP

花粉培养的发展简介 花药培养 花粉培养 一、花粉的游离 二、花粉的发育时期 一般比较常选择的花粉是处于单核晚期（或叫单核靠边期）。 检验花粉发育时期的方法：花粉发育时期的鉴定一般采用涂片法，用1% 醋酸洋红或花青—络矾法进行染色。 在单核晚期，花粉的主要特点是形成液泡，但营养核及生殖核还未出现。 三、花粉的预处理 花粉的预处理可以使花粉细胞的某些基因发生改变从而引起花粉的内源激素与蛋白质产物不同，或使环境渗透压的改变从而使愈伤组织的产量提高 。 禾谷类花粉游离较常采用的预处理方法 预处理方法主要有物理方法和化学方法，一般禾谷类作物使用的花粉预处理方法主要是低温处理和甘露醇处理。 低温与甘露醇的处理的作用对象一般有别，低温处理一般是作用于幼穗，且处理的时间较长，而甘露醇可直接作用于花粉或花药，作用时间大约在三天左右，使用的甘露醇浓度为0.3 mol/l 、pH为5.6能有效提高愈伤组织的质量。 四、培养基的影响 一般禾谷类花粉培养选用N6培养基。 改良的N6液体培养基可使花粉均匀分布。 培养基成分的影响 (二)硼酸 在自然条件下,花粉中硼的含量是不足的,这种不足通常由柱头和花柱内较高浓度的硼来进行补偿。 在离体条件下,适宜的硼处理是花粉萌发和生长所必需的, 一定浓度的硼酸有利于花粉萌发和花粉管的生长，能有效提高花粉的萌发率。 （四）激素 花粉离体萌发中添加植物生长调节剂能促进花粉的萌发和花粉管的生长,但不同的激素种类和浓度对花粉的萌发和花粉管的生长影响不同。 赤霉素能抑制植物体内生长素分解系统的活动，以保证体内生长素含量水平的相对增加，从而促进花粉萌发和花粉管生长。低浓度的赤霉素对花粉萌发和花粉管生长无影响，当浓度超过50 mg/L 时则起抑制作用。 五、培养条件 温度： 禾谷类花粉对温度的反应非常敏感,培养温度2～3 ℃之差就可能导致花粉愈伤组织的产量大幅度甚至成倍提高或降低，也可导致花粉愈伤组织的质量发生明显变化。愈伤组织一般置于24-28 ℃的暗环境中培养，而分化培养的条件根据各种植物的不同选择也应有所不同。 光照： 小麦分化的培养条件为温度20～25 ℃，光照强度1500 lx ,光照周期为16 h ；大麦选择在25±1 ℃、光强1800 lx、光照周期为12 h 的条件下培养；水稻分化培养条件为温度26～27 ℃，光照周期10 h ，光照强度为2000 lx。 培养密度 在接种时应根据培养瓶的体积、花粉的大小及培养基的体积控制花粉的密度，一般地，有效的培养密度范围为(5×103~2×104)·mL-1 培养过程中存在问题 花粉培养力的大小受多基因控制； 花粉颗粒小不易操作； 花粉获取时易受污染且不易去污； 培养条件不易控制 在游离花粉培养中，雄核发育是在脱离花药内环境的状况下独立进行的，这是花粉培养不易成功的重要原因。 花粉培养已被广泛运用，主要用于减数分裂、花粉生长机制的研究，生理、生化、遗传等基础理论的研究。在遗传育种方面花粉培养可以缩短育种周期，为新品种的培育开辟了新途径，提高了目标基因型的选择效率；用于远缘杂交育种，克服杂种不育性；便于隐性突变体得筛选，大大提高突变育种的工作效率。 花粉培养中的诱导单倍体植株的发育调控及其分子机理研究不够，小孢子的诱导机制、启动机理、发育途径及其与生理生化变化的关系等都尚不明确，有待进一步研究小孢子的发育调控机理，从而主动地进行调控，以定向增加突变，筛选目的性状，增强育种的可预见性，这将是花粉培养育种的发展方向。 禾谷类花粉培养 的 影响因素 1964年，Guha 和Maheshwari首次对毛蔓陀 (DaturametelL.）进行花药培养并成功获得单倍体植株。 点击添加标题 点击添加标题 点击添加标题 1、获得纯系育种材料、缩短育种年限、提高育种效率。 2、进行植物遗传变异规律研究，为植物育种提供遗传理论依据。 3、克服远缘杂种的不育性，获得可育远缘杂种。 4、为进行植物细胞遗传学等基础性研究提供材料。 花粉培养的目的 影响禾谷类花粉培养的因素 花粉 的 游离 花粉 的 预处理 培养 的 条件 花粉 的发育时期 培养基 的 成分 禾本科谷类作物通常采用磁拌法和漂浮释放法获得游离花粉。 搅拌法可能导致花粉受到不同程度的机械受伤，但可使花粉分离充分。 漂浮释放法在分离过程中不损伤花粉细胞，但分离过程较缓慢且分离花粉欠充分。 蔗糖 硼酸 外源钙 激素 适宜浓度（一般是155 g/L ）时，花粉内外的渗透压才能保持平衡，从而维持花粉正常的生活力，有利于花粉萌发。 （一）蔗糖 当外界糖浓度高于花粉内部的浓度时，则会造成花粉的质壁分离而抑制花粉萌发。 当外