第六章-大肠杆菌基因工程.pptVIP

整合型异源蛋白的表达 DNA体内重组的基本原理 在很多原核细菌细胞中，染色体DNA链上的两个同源区之间可发生所谓的同源重组，其频率与细菌种类、两个同源区之间的距离同源区的长度、同源程度密切相关。一般地说，距离越远、长度越长、同源性越高，重组的频率也就越高，反之亦然。 同源重组有整合和交换两种形式，前者只需要一个断裂位点，而后者涉及两个断裂位点 同源序列依赖型的体内重组：基本形式 整合型异源蛋白的表达 DNA体内重组的基本原理 同源序列依赖型的体内重组：同源整合 ori 目的基因 同源区域 标记基因 整合位点 染色体DNA 整合型异源蛋白的表达 DNA体内重组的基本原理 同源序列依赖型的体内重组：同源交换 ori 目的基因 同源区域 标记基因 交换区域 染色体DNA ori 标记基因 + 蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建 无论是在真核生物还是在原核细胞中，重组目的蛋白表达后都会面临被降解的命运，其稳定性甚至还不如半衰期较短的受体细胞内源性蛋白质。 在大多数情况下，重组目的蛋白的不稳定性可归结为对受体细胞蛋白酶系统的敏感性。然而越来越多的实验表明，重组目的蛋白在受体细胞内的半衰期可以通过蛋白序列的人工设计以及受体细胞的改造加以调整和控制。 蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建 实验结果表明，大多数不稳定的重组目的蛋白是被大肠杆菌中的蛋白酶La和Ti降