甘草中甘草酸的提取纯化以及多糖的提取.docVIP

生 化 实 验 报 告 设计性实验 甘草中甘草酸的提取纯化以及多糖的提取 一.实验目的 （一）掌握甘草酸的提取原理和方法。 （二）熟悉皂甙的性质和测定方法。 （三） 掌握甘草酸的分离纯化方法。 掌握多糖类物质的提取方法。 二.实验原理 （一）甘草酸提取原理 中药甘草，属豆科植物，生长于草原向阳干燥钙质土地以及河岸沙质地土壤中，富含甘草皂苷，又称甘草酸，特点是高甜度、低热能、安全无毒，起泡性和溶血作用很低。具有增溶、增加药物稳定性、提高生物利用度及降低毒副作用的功效。甘草酸的许多金属盐，人体可适当吸收，不易造成元素的积蓄中毒。因此常被用来配制成健脾开胃、止咳化痰、顺气止喘、治疗慢性肝炎、降低血脂的良药。同时还具有抗癌防癌、干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂等功能。 甘草酸在原料中以钾盐或钙盐形式存在，其盐易溶于水，因此可用极性溶剂提取，提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离甘草酸。 （二）甘草酸的纯化原理 提取的甘草酸溶液中，还含有大量的蛋白质、果胶、鞣质等物质，在提取过程中，这些杂质也转移到了提取液中。由于这些物质的大量存在，使得产物的含量降低，试验误差加大，同时甘草酸作为药物和保健品等使用时，杂质还会引起一些副作用，因此必须将这些杂质除去，对甘草酸进行纯化。 提取后滤液再加硫酸，因难溶于酸性溶液而析出游离甘草酸。 （三）残渣中甘草多糖的提取分离原理 甘草在中医处方中占有举足轻重的地位，被医药界誉为“众药之王”。甘草的主要有效成分是甘草酸、黄酮和多糖类化合物，但目前多糖还没有被有效利用。甘草多糖具有抗肿瘤、免疫调节作用、抗辐射、抗病毒、抗溃疡、降血糖、抗衰老和免疫调节等作用，因此对多糖的研究越来越受到人们的重视。本实验以提取甘草酸后的甘草渣为原料提取多糖，这对甘草资源的综合利用和多糖的开发均具有特别重要的意义。 甘草多糖为易溶于水的白色粉末，熔点很高，不溶于酒精等有机溶剂，故可用水提醇沉法得到甘草多糖。 三.实验器材 （一）仪器、用具:剪枝剪、粉碎机、烘箱、微波炉、电子天平、抽滤机、分光光度计、真空干燥箱、XAD9 型树脂、旋转蒸发仪、柱层析系统（层析柱，恒流泵，紫外监测仪，部分收集器） （二）试剂：甘草、极性溶剂、硫酸、苯酚、95%乙醇、葡萄糖标准品、70%乙醇、甘草酸标准品。 四.实验内容及步骤 （一）甘草酸的提取、测定 1.将预先晾干的甘草用剪枝剪剪成小块，将小块放入烘箱中进一步烘干一昼夜。 2.将已烘干的甘草小块用粉碎机将其粉碎成粉末。 3.将甘草粉末用筛子筛去大的颗粒。 4.称10g 甘草粉末, 加蒸馏水100mL, 在微波炉内加热4min, 在微波炉内加热过程中避免爆沸，防止提取液流失。把已经提取完的提取液用一层滤纸减压过滤，留取残渣和提取液备用。量取提取液的体积。 5.甘草酸的测定：用甘草酸标准品绘制标准曲线 精密称取甘草酸标准品10.00mg，置于10mL容量瓶中，加70%乙醇溶解定容。精密吸取0.50mL，0.75mL， 1.00mL，1.25mL，1.50mL，分别置于25mL容量瓶中，加70%乙醇摇匀，定容，静置20min，在波长254nm处测定吸光值。以浓度x(mg/mL)为横坐标，吸光度y为纵坐标绘制标准曲线，计算出回归方程。 提取液摇匀，准确移取5ml的提取液转移到25ml容量瓶中，用70%乙醇定容，静置20min后，于254nm处测定吸光度。测定吸光度值，由回归方程求出待测样品总甘草酸浓度，进而得出甘草酸的提取率。 A=13.17C—0.017 （参考） 式中：A-吸光度； C-浓度，mg/ml 甘草酸提取率= nCV/m×100% 其中：n-提取液稀释倍数 C-提取液中甘草酸的浓度mg/ml V-提取液体积，ml m-甘草的质量，mg 6. 实验数据及处理 （1）标准曲线 编号 0 1 2 3 4 5 吸光度 0 0.2731 0.3899 0.4936 0.5865 0.7336 浓度mg/ml 0 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 甘草酸标准曲线 甘草酸标准曲线 y = 11.866x + 0.0172 R 2 = 0.9954 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 甘草酸浓度mg/ml 吸光度 系列1 线性 (系列1) （2）样品的提取率 项目 结果 吸光度 0.0221 浓度 0.000413 稀释倍数 5 提取液体积/ml 100 甘草质量/g 10 提取率 0.020647 （二）甘草酸的纯化 1. 甘草酸滤液预处理：甘草酸溶液减压浓缩至大约30ml，滴加3.5mo