体外诱导小鼠心脏CD51细胞分化为血管内皮细胞的研究-新医学.PDFVIP

新医学２０１８年５月第４９卷第５期 ３１５ ·基础研究论著 · ＋ 体外诱导小鼠心脏 ＣＤ５１ 细胞分化为血管 内皮细胞的研究 高山泉　廖延　姜美花　杜钰　谢冬梅　祝双华　彭朝权 ＋ 　　 【摘要】　目的　探讨小鼠心脏ＣＤ５１细胞的分离培养及体外定向诱导分化为血管内皮细胞的 可行性，为其治疗心脏血管内皮损伤提供理论依据。方法　取出日龄为７ｄ的Ｃ５７ＢＬ／６乳鼠心脏， ＋ 用流式分选法分选原代细胞、悬浮培养法培养及纯化心脏 ＣＤ５１细胞。用内皮生长培养基（ＥＧＭ２） ＋ 对纯化和扩增后的ＣＤ５１细胞进行体外诱导内皮分化２０ｄ。诱导后观察细胞形态变化；实时荧光定 量ＰＣＲ分析内皮相关基因ＣＤ３１、ＣＤ３４、ｖＷＦ、ＶＥＧＦＲ２及ＶＥＣａｄｈｅｒｉｎ的ｍＲＮＡ表达；细胞免疫荧 光技术、流式表型分析术检测内皮相关标志 ＣＤ３１、ＶＥＧＦＲ２及 ｖＷＦ的表达；测定细胞一氧化氮 （ＮＯ）含量、行体外血管形成实验以鉴定其功能。结果　诱导内皮分化后细胞变为短梭形，呈铺路石 样排列生长；荧光定量ＰＣＲ结果显示诱导后细胞ＣＤ３１、ＣＤ３４、ｖＷＦ、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＣａｄｈｅｒｉｎ的ｍＲ ＮＡ相对表达量较诱导前增加（ｔ值分别为２４５２９、６３８３、２５８７２、５２５６、５２５５，Ｐ均 ＜００５）；细 胞免疫荧光染色及流式表型分析结果均显示诱导后细胞表达 ＣＤ３１、ＶＥＧＦＲ２及 ｖＷＦ；诱导后细胞 ＋ ＮＯ含量较诱导前增加（ｔ＝９５４９，Ｐ＝００１１）并具有体外形成管腔样结构的能力。结论　心脏ＣＤ５１ 细胞具有在体外定向诱导分化为血管内皮细胞的能力。 　　 【关键词】　间充质干细胞；ＣＤ５１；内皮细胞；诱导分化 ＋ ＩｎｖｉｔｒｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｒｄｉａｃＣＤ５１ ｃｅｌｌｓｉｎｔｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｍｏｕｓｅｍｏｄ ｅｌｓ　ＧａｏＳｈａｎｑｕａｎ，ＬｉａｏＹａｎ，ＪｉａｎｇＭｅｉｈｕａ，ＤｕＹｕ，ＸｉｅＤｏｎｇｍｅｉ，ＺｈｕＳｈｕａｎｇｈｕａ，ＰｅｎｇＣｈａｏｑｕａｎＤｅ ｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ，ｔｈｅＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｕｎＹａｔｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ＰｅｎｇＣｈａｏｑｕａｎ，Ｅｍａｉｌ：ｐｅｎｇｃｑ１２３４５６＠１６３ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅ ＋ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｃａｒｄｉａｃＣＤ５１ ｃｅｌｌｓｉｎｔｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ａｉｍｉｎｇｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒ ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃａｒｄｉａｃｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｎｊｕｒｙＭｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｈｅａｒｔｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ７ｄａｙｏｌｄ ＋ Ｃ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅＰｒｉｍａｒｙｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇＴｈｅｃａｒｄｉａｃＣＤ５１