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三、HPCE中影响电渗流的因素 factors influence electroosmosis 1.电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同； 3. 电解质溶液性质的影响 （1）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大； pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （2）阴离子的影响 在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液粘度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。 4. 温度的影响 毛细管内温度的升高，使溶液的粘度下降，电渗流增大。温度变化来自于“焦耳热”； 焦耳热：毛细管溶液中有电流通过时，产生的热量； HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。 温度每变化1℃，将引起背景电解质溶液粘度变化2%～3%； 5. 添加剂的影响 （1）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的粘度增大，电渗流减小。 （2）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向； 加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁表面负电荷增加，zeta电势增大，电渗流增大； （3）加入有机溶剂如甲醇、乙腈，使电渗流增大。 四、淌度 mobility 淌度：带电离子在单位电场下的迁移速度； 淌度不同是电泳分离的基础。 1.绝对淌度(absolute mobility)μab 无限稀释溶液中带电离子在单位电场强度下的平均迁移速度，简称淌度。可在手册中查阅。 2.有效淌度(effective mobility)μef 实际溶液中的淌度(实验中测定的)。 μef=∑aiμi ai —溶质i 的解离度；μi —溶质i 在解离状态下的绝对淌度 3.表观淌度 μap 离子在实际分离过程中的迁移速度（表观迁移速度）： νap=μap ? E 五、HPCE中的参数与关系式  parameters and relation in HPCE 1.迁移时间（保留时间） HPCE兼具有电化学的特性和色谱分析的特性。有关色谱理论也适用。 V—外加电压；L—毛细管总长度； 2.分离效率（塔板数） 在HPCE中，仅存在纵向扩散，σ2=2Dt 扩散系数小的溶质比扩散系数大的分离效率高，分离生物大分子的依据。 3.分离度 影响分离度的主要因素：工作电压V；毛细管有效长度与总长度比；有效淌度差。 分离度可按谱图直接由下式计算： 六、影响分离效率的因素—区带展宽 factors influenced the efficiency—band broadening 1.纵向扩散的影响 在HPCE中，纵向扩散引起的峰展宽：σ2=2Dt 由扩散系数和迁移时间决定。大分子的扩散系数小，可获得更高的分离效率，大分子生物试样分离的依据。 2.进样的影响 当进样塞长度太大时，引起的峰展宽大于纵向扩散。分离效率明显下降；理想情况下，进样塞长度： Winj= (24D t )1/2 实际操作时进样塞长度小于或等于毛细管总长度的1%～2%。 3.焦耳热与温度梯度的影响 电泳过程产生的焦耳热可由下式计算： ?m—电解质溶液的摩尔电导；I—工作电流：cm—电解质浓度； 散热过程中，在毛细管内形成温度梯度（中心温度高），破坏了塞流，导致区带展宽。 改善方法： （1）减小毛细管内径； （2）控制散热； 4.溶质与管壁间的相互作用 存在吸附与疏水作用，造成谱带展宽； 蛋白质、多肽带电荷数多，有较多的疏水基，吸附问题特别严重，是目前分离分析该类物质的一大难题。 细内径毛细管柱，一方面有利于散热，另一方面比表面积大，又增加了溶质吸附的机会。 减小吸附的方法和途径：加入两性离子代替强电解质，两性离子一端带正电，另一端带负电，带正电一端与管壁负电中心作用，浓度约为溶质的100-1000倍时，抑制对蛋白质吸附，又不增加溶液电导，对电渗流影响不大。 5.其他影响因素 （1）电分散作用对谱带展宽的影响 当溶质区带与缓冲溶液区带的电导不