微生物的实验室培养1.ppt

平板划线操作 平板划线操作 平板划线操作 土壤稀释液 平板划线操作 专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养 ——实验操作 复习巩固 菌种鉴定的重要依据是 ； 培养基的四大基本营养成分是 、 、 、 ； 培养基除了为微生物提供营养物质之外，还需要满足微生物生长对 、 、 的要求； 获得纯净培养物的关键是 ； 菌落 水 碳源 无机盐 氮源 pH 特殊营养物质 氧气 防止外来杂菌的入侵 二.实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （二）纯化大肠杆菌 大肠杆菌 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加水，定容至1000mL （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量 牛肉膏：0.5g 蛋白胨：1.0g NaCl：0.5g 琼脂：2.0g 2.称量： 准确称取各成分 电子天平 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 2.称量： 准确称取各成分 注意：称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖 牛肉膏：0.5g 蛋白胨：1.0g NaCl：0.5g 琼脂：2.0g （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 3.溶化： ①加水加热溶化牛肉膏 牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，溶化后取出称量纸 ②加入蛋白胨和氯化钠，玻棒搅拌溶解 ③加入琼脂，不断搅棒熔解 ④用蒸馏水定容到100mL 目的：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 4.调 pH： 用1mol/L的NaOH溶液调节pH至偏碱性（pH7.6） pH试纸 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 5.灭菌： 将配置好的培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅内灭菌15～30min （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 5.灭菌： 将配置好的培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅内灭菌15～30min 将培养皿用旧报纸包紧，放入干热灭菌箱内灭菌2h （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 6.倒平板： 待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 讨论1：你用什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，感觉温度刚好不烫手 倒平板操作 1 1.右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞 倒平板操作 2 2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 讨论2：为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 倒平板操作 3 3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10-20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 倒平板操作 4 4.等待平板冷却凝固（大约5-10min）后，将平板倒过来放置 讨论3：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结出水珠，凝固后的培养基表面的温度较高，将平板倒置，既可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可避免培养基中水分过快地挥发 讨论4：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 不能，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，造成污染 注意：倒平板时，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 倒平板操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 7.无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h，以检查灭菌是否彻底 （二）纯化大肠杆菌 1.微生物的分离与纯化： 从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程，称为微生物的分离与纯化 利用固体培养基，将混杂细菌分散或稀释成单个细胞，使其繁殖成单个菌落 2.微生物接种方法： ①平板划线法 ②稀释涂布平板法 工具：接种环