叶绿体色素质与叶绿素ab含量测定.ppt

* 实验六 叶绿体色素的性质 及叶绿素a、b含量的测定 一、叶绿体色素的性质 实验原理 光合膜 叶绿体色素 实验原理 叶绿体色素 叶绿素 类胡萝卜素 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素b 叶绿素a （含量占3/4） （含量占1/4） 实验步骤 1. 叶绿体色素的提取： 称取新鲜叶片4g，剪碎。放入研钵中加丙酮10ml， 少许碳酸钙（保护叶绿素）和石英砂（增大摩擦，使叶片 研磨得更充分），研磨成匀浆，再加丙酮50ml，避光保存 至残渣发白，以漏斗过滤之（三角烧瓶），即为色素提取 液，放于暗处备用。 Chlb: C32H28O2N4Mg COOCH3 COOC20H39 Chla: C32H30ON4Mg COOCH3 COOC20H39 + H2O Mg Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 头部： 4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连 尾部： C20H39(叶醇) 2. 光照对叶绿素的影响 取两只试管，分别加入提取液少许： 一支放入黑暗处 一支放在直射光中 2小时后观察颜色变化 ？ 3. 酸对叶绿素的影响 取少许提取液于试管中，逐滴加入浓HCl 摇匀，观察颜色变化 加醋酸铜粉末少许 水浴，微微加热 观察颜色变化 ？ ？ 4. 金属离子对叶绿素的影响 对酸、碱、光、热不稳定 酸性条件下：叶绿素的镁离子被H取代 碱性条件下：叶绿素水解，脱植基叶绿素 叶绿素酶：叶绿素脱植醇 光照：引起叶绿素光敏氧化 金属离子：镁离子可被铜、锌、铁等取代 热处理：叶绿素转化为脱镁叶绿素 Mg Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 头部： 4个吡咯环+4个甲烯基连接，形成卟啉环，卟啉环+Mg，与四个吡咯环上的N相连，再与一个副环相连 尾部： C20H39(叶醇) 叶绿素的降解与色变 -COOCH3 -COOCH3 5. 叶绿素的荧光现象： 取提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光 一侧提取液的颜色 ？ 6. 黄色素与绿色素的分离 取分液漏斗 加20ml乙醚 加提取液10ml 摇动 沿漏斗边缘加30ml蒸馏水 轻摇，静置 · · 分层，弃去下层 蒸馏水冲洗1～2次 加5ml 30％KOH甲醇溶液， · · 静置10min 加水10ml 振动，静置 分层 用力摇动 ？ ？ ？ ？ 作 业 描述各实验结果并作出解释 二、叶绿素a、b含量测定 实验原理 （含量占3/4） （含量占1/4） 叶绿体色素 叶绿素 类胡萝卜素 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素b 叶绿素a 分光光度法 根据叶绿素对某一特定波长的可见光具有吸收能力， 用Lambert- Beer定律计算出叶绿素的含量。 Lambert- Beer定律 A ＝ KLC 吸光度 吸收系数 浓度 *