生物化学试验II.ppt

生物化學實驗(II) 前言 由於不論在學術研究與生物科技的應用上，蛋白質一直是一個重要的標的。 本課程乃以純化特定的蛋白質為目標，藉由專題方式進行蛋白質純化驗實，將各種不同的純化技術包括實驗原理安排在本課程中。 教學目標 讓學生了解每個純化策略的原理 讓學生習得蛋白質純的操作技巧。 並教導學生如何將整理分析過的實驗結果以書面與口頭報告的方式呈現。 實驗課程表 實驗儀器 學生數據展現 SDS及Western blotting顯色結果 A： SDSCBG 染色結果 B： Western blotting顯色結果 1.?-Amylase(1μg); 2.Gel filtration比活性最高 3. Gel filtration 蛋白質量最高 4. Ion Exchange比活性最高 ; 5. Ion Exchange蛋白質量最高; 6. 100% 鹽析(3μg) ; 7. 55% 鹽析(3μg);8. 原液(3μg); 9. Marker; 10.原液(0.6μg) Native PAGE及Starch PAGE顯色結果 課堂問卷 95學年度 修課人數:40人。(A組20人、B組:20人) 施做問卷:40人 課堂問卷 * * 實驗期末考 科學新知介紹、清理實驗室 口頭報告 SDSElectrophoresis (Coomassie Blue Stainning) Western Blotting Native PAGE Electrophoresis (需5小時) (需7小時) (需7小時) 口頭報告 Ion exchanger Chromatography Gel filtration Chromatography (需13小時) (需14小時) 口頭報告 Protein Extraction (ammonium sulfate salting out and dialysis) (需5小時) 中午12:10 Check in(清理實驗室及藥品配製及流程解釋) 實驗項目 預估時間 A： Native PAGE B： Starch PAGE 1. Marker ；2.混合原液(0.6μg) 3.60%鹽析(3μg); 4.100% 鹽析(3μg) 5. Ion Exchange濃縮(1μg)6.Gel filtration 比活性最高 7. ?-Amylase(0.1μg); 0/40 15/40 33/40 (e)西方轉漬及抗體呈色法 0/40 29/40 35/40 蛋白質聚丙稀醯胺膠體電泳分析 1/40 5/40 30/40 層析法二- 離子交換樹酯 2/40 5/40 25/40 層析法一- 膠體過濾法 0/40 0/40 10/40 硫酸胺沉澱及透析 考慮減少 考慮增加 有趣 蛋白質的純化與鑑定 我覺得教材中 6-1 　 　 　 　 　　 28/40 (3)容易了解 12/40 (2)有些不易了解 0/40 (1)非常不易了解 我覺得教材撰寫方式 5 　 　 4/40 (3)過少 33/40 (2)適中 3/40 (1)過多 我覺得教材份量 4 　 　 40/40 (3)吻合 0/40 (2)有些相合 0/40 (1)極不合 教材與課程設計的目的 3 　 　 1/40 (3)太簡單 36/40 (2)恰當 3/40 (1)太深奧 我覺得教材內容 2 　 　 2/40 (3)僅為取得學分 40/40 (2)學習基本觀念、原理及理論 40/40 (1)獲得實用的技術 我覺得此課程預期的收穫是 1 　 　 比例 選項 問題