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显微镜的重要光学技术参数 在镜检时，人们总是希望能清晰而明亮的理想图象，这就需要显微镜的各项 光学技术参数达到一定的标准，并且要求在使用时，必须根据镜检的目的和实际 情况来协调各参数的关系。只有这样，才能充分发挥显微镜应有的性能，得到满 意的镜检效果。 显微镜的光学技术参数包括：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场宽度、覆 盖差、工作距离等等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互 制约的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以 保证分辨率为准。 一． 数值孔径（Numerical aperture） 数值孔径简写NA，数值孔径是物镜和聚光镜的主要 技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低 的重要标志。其数值的大小，分别标科在物镜和聚光 镜的外壳上。 数值孔径（NA）是物镜前透镜与被检物体之间介质的 折射率（h）和孔径角（u）半数的正玄之乘积。用公 式表示如下： NA=hsinu/2 孔径角又称“镜口角”，是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成 的角度。孔径角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比， 与焦点的距离成反比。 显微镜观察时，若想增大NA值，孔径角是无法增大的，唯一的办法是增大介质 的折射率h值。基于这一原理，就产生了水浸系物镜和油浸物镜，因介质的折射 率h值大于一，NA值就能大于一。 数值孔径最大值为1.4，这个数值在理论上和技术上都达到了极限。目前，有用 折射率高的溴萘作介质，溴萘的折射率为1.66,所以NA值可大于1.4。 这里必须指出，为了充分发挥物镜数值孔径的作用，在观察时，聚光镜的NA值 应等于或略大于物镜的NA值， 数值孔径与其他技术参数有着密切的关系，它几乎决定和影响着其他各项技术参 数。它与分辨率成正比，与放大率成正比，与焦深成反比，NA值增大，视场宽 度与工作距离都会相应地变小。 二． 分辨率（Resolving power） 分辨率又称“鉴别率”，“解像力”。 是衡量显微镜性能的又一个重要技术 参数。 显微镜的分辨率用公式表示为： d=l/NA 式中d为最小分辨距离；l为光线的波 长；NA为物镜的数值孔径。可见物镜 的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光 线波长越短，则d值越小，分辨率就越高。 要提高分辨率，即减小d值，可采取以下措施 1． 降低波长l值，使用短波长光源。 2．曾大介质h值和提高NA值 （NA=hsinu/2）。 3．增大孔径角。 4．增加明暗反差。 三． 放大率（Magnification） 放大率就是放大倍数，是指被检验物体经物镜放大再经目镜放大后，人眼所看到 的最终图象的大小对原物体大小的比值，是物镜和目镜放大倍数的乘积。 放大率也是显微镜的重要参数，但也不能盲目相信放大率越高越好，在选择时应 首先考虑物镜的数值孔径。 四． 焦深（Depth of focus） 焦深为焦点深度的简称，即在使用显 微镜时，当焦点对准某一物体时，不 仅位于该点平面上的各点都可以看 清楚，而且在此平面的上下一定厚度 内，也能看得清楚，这个清楚部分的 厚度就是焦深。焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检 物体的一薄层，焦深与其他技术参数有以下关系： 1．焦深与总放大倍数及物镜的数值孔镜成反比。 2．焦深大，分辨率降低。 由于低倍物镜的景深较大，所以在低倍物镜照相时造成困难。 五． 视场直径（Field of view） 观察显微镜时，所看到的明亮的原形范围叫 视场，它的大小，是由目镜里的视场光阑决 定的。 视场直径也称视场宽度，是指在显微镜下看 到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际 范围。视场直径愈大，愈便于观察。 F=FN/Mob F: 视场直径，FN：视场数，Mob:物镜放大率。 视场数（Field Number, 简写为FN），标刻在目镜的镜筒外侧。 由公式可看出： 1． 视场直径与视场数成正比。 2． 增大物镜的倍数，则视场直径减小。因此，若在低倍镜下可以看到被检物体 的全貌，而换成高倍物镜，就只能看到被检物体的很小一部份。 六． 覆盖差 显微镜的光学系统也包括盖玻片在内。由于盖玻片的厚度不标准，光线从盖玻片 进入空气产生折射后的光路发生了改变，从而产生了相差，这就是覆盖差。覆盖 差的产生影响了显微镜的成响质量。 国际上规定，盖玻片的标准厚度为0.17mm, 许可范围在0.16—0.18mm.,在物镜 的制造上已将