第八章转基因植物.pptVIP

植物作为制备基因工程疫苗生物反应器的优势 ①微生物发酵系统不能对真核蛋白质疫苗进行正确的翻译后加工，有时导致其免疫原性变弱。而植物与动物细胞表达系统，可对表达产物进行转译后加工，保持了自然状态下的免疫原性。 ②细菌在发酵过程中常产生一些不溶性聚合物，要重新溶解并折叠成天然蛋白质则需要很高成本，且发酵需要庞大设备投资。 ③动物细胞生产基因工程疫苗，常用动物病毒作为载体导入抗原基因，在生产过程中也可能污染动物病毒。 ④转基因植物中的外源基因可通过植物杂交的方法进行基因重组而达到在植物体内积累多基因的目的。 ⑤植物表达系统生产的疫苗可以直接储存在植物种子和果实中，无需冷连系统设备进行储藏运输，故易于长距离运输和普及推广。不仅降低了成本且方便，可随时长期给药。 ⑥疫苗抗原基因转入可食用的植物后，可供人直接服用或饲喂动物，不需要分离提纯。这样可节约许多仪器设备，降低生产成本，使用方便。 ⑦提供营养。通过转基因植物生产的口服疫苗，不仅提供了疫苗，而且提供了营养。 转基因食品 安全吗?! （3）翻译水平的鉴定 为检测外源基因转录形成的mRNA能否翻译，还必须进行翻译或者蛋白质水平检测。 主要方法：Western杂交 免疫检测 蛋白质芯片 酶联免疫吸附（ELISA）检测。 ELISA检测是利用抗原与抗体反应的特异性，当抗原与抗体结合时，通过结合在抗体上的酶作用于特定的底物后发生显色反应，借助于比色鉴定转基因植物。 Coated Surface Y Monoclonal Antibody A Coated Surface Antigen Coated Surface B C Coated Surface TMB TMB HPR Detector Antibody D * 酶链免疫反应 (ELISA) * 酶链免疫反应 (ELISA) Southern杂交可以确定外源基因在植物中的组织结构、外源DNA整和的位置及拷贝数、转基因植株F1世代外源基因的稳定性。 Northern杂交用于检测转基因在转录水平上的表达，与Southern杂交相比，更接近于性状表现，更有现实意义，被广泛用于转基因植株的检测。 Western杂交检测目的基因在翻译水平的表达结果，能直接显示目的基因在转化体中是否经过转录、翻译最终合成蛋白而影响植株的性状表现。 第三节 改进转基因的技术 重点：如何提高外源基因的表达水平 难点：转基因沉默的分子机理 转基因沉默是指利用遗传转化方法导入并稳定整合进受体细胞中的完整的外源基因在当代转化体或在其后代中表达受到抑制的现象。 主要原因：在转基因之间或是在转基因与内源的同源基因之间，存在着序列同源性的缘故。 其他原因：转基因的拷贝数和构型、环境条件和发育因子，以及DNA的甲基化等。 DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA三种不同形式之间。 转录水平的基因沉默 (Transcriptional Gene Silencing，TGS) 转录后水平的基因沉默 (Post-transcriptional Gene Silencing，PTGS) （一）转录水平的基因沉默 (TGS) 转录水平的基因沉默是指转基因RNA合成的失活。它的发生主要是由于转基因无法被顺利转录成相应的RNA而导致基因沉默。 转基因位置效应引起的转基因沉默 转基因及其启动子甲基化 多拷贝重复转基因序列引起的转录水平基因沉默 转基因沉默与DNA序列在寄主染色体基因组中的插入方式、拷贝数量及插入部位的特性等物理状况有密切关系 插入部位及其周围基因组序列组成 转录不活跃区域或异染色质区域 位置效应引起的沉默与基因组中是否存在同源序列无关 1、转基因位置效应引起的转基因沉默 2、多拷贝重复转基因序列 直接基因转化法常导致多拷贝转基因在宿主细胞基因组中的整合，多拷贝转基因无论是单位点整合还是多位点整合分散在基因组中，都能使转基因植株发生较高机率的基因沉默现象。 重复序列间很可能通过异位配对，即多拷贝重复转基因序列之间以及转基因与转录产物之间的配对，使整合位点的染色质发生异染色质化或使DNA甲基化，从空间上阻碍了转录因子与转基因的接触，造成转录受抑，引起转录水平基因沉默。 3、转基因及其启动子甲基化 甲基化是活体细胞中最常见的一种DNA共价修饰形式，它通常发生在DNA的C碱基上，C甲基化的频率在人类及高等植物中分别可达4%和36%。 几乎所有的转基因沉默现象与转基因及其启动子的甲基化有关 发生在转基