变性高效液相色谱及其在法医DNA分析中的应用.PDF

DOI :10.16467/j.1008 -3650.2005.03.011 ·　· 刑事技术2005 年第3 期 变性高效液相色谱及其在法医DNA 分析中的应用 1, 2 2 (1.浙江省舟山市定海区人民检察院, 316000;2.华中科技大学同济医学院法医学系, 武汉　430030) 王功跃 , 黄代新 　 摘要:　变性高 液相色谱(DHPLC)是目前检测基因突变的最佳技术平台之一。本文简要介绍了DHPLC 的 工作原理及主要技术特点,并对其在法医DNA 分析中的应用进行综述。 关键词:变性高 液相色谱;突变;法医DNA 分析 中图分类号:DF795.1　　 献标识码:A 　　 章编号:1008-3650 (2005)03-0034-04 Denaturing high-performance liquid chromatography and its application in forensic DNA analysis WANG Gong-y ao,HUANG Dai-x in(PeoplesProcuratorate, Ding HaiDistrict, Zhou Shan City, Zhej iang Province, 316000 　 China) ABSTRACT:　At pr s nt, d naturing high-p rformanc liquid chromatography (DHPLC)is th b st t chniqu platform for d t cting mutation.Th principl and primary t chniqu charact ristic of DHPLC w r bri fly introduc d in this pap r, also th application of DH- PLC in for nsic DNA analysis was summariz d. KEY W RDS:　d naturing high-p rformanc liquid chromatography;mutation;for nsic DNA analy sis 　　变性高效 相色谱(d naturing high-p rformanc 链的疏水基团发生反应,从而在柱基质和核酸分子之 liquid chromatography, DHPLC )又称温度调控异源 间发挥桥梁作用,使DNA 吸附于固定相。双链DNA 双链分析, 由美国Stanford 大学O fn r 和Und rhill 在分离柱的滞留主要取决于流动相中TEAA 所带正 [1] 于1995 年建立 , 是一种可自动检测单碱基替代及 电离子和DNA 中带负电离子的结合力。DNA 链越 小片段核苷酸插入或缺失的高性价比分离技术。因 长,带有的磷酸基团就越多, 故有较多的TEAA 结合 其具有自动化、快速、经济、检出率高、检出DNA 片 使其在柱中滞留的时间越长,通过增加流动相中具有 段大小范围广等特点而成为目前分离核苷酸片段及 亲水性的乙腈的浓度使其将 DNA 置换造成DNA 和 分析基因突变和SNPs 的最佳技术平台之一,被广泛 TEAA 的脱离,核酸片段就会按分子量从小到大的顺 应用于疾病相关基因研究、药物基因组学研究、人类 序被洗脱而获得分离(图1)。 基因多态性及人类进化研究等领域。 1　DHPLC的工作原理 1.1　基本原理 DHPLC 是利用离子对反相高效 相色谱(IP- ® RP -HPLC )方法进行核酸分离的。以WAVE 核苷 ® 酸片段分析系统为例, DNAS p 柱是其核心技术, 柱中的基质为聚苯乙烯 二乙烯基苯交联聚合物微球 体, 固定相为碳 18 烷烃链, 两者之间形成碳碳共价 键共同组成柱填料, 填料是电中性、疏水性的,不易与 ® 核酸发生反应。三乙基铵醋酸盐(TEAA )是一种离 图1　非变性条