食用油脂中脂肪酸的综合检测法.doc

PAGE 2 附件3 食用油脂中脂肪酸的综合检测法 BJS 201712 范围 本方法适用于食用植物油（花生油、大豆油、玉米油、植物调和油、橄榄油、葵花仁籽油、芥花油、菜籽油、香油、棕榈油等）是否存在异常的检测及识别。 方法原理 将样品甲酯化，采用气相色谱-串联质谱内标法定量测定13种脂肪酸甲酯含量，再根据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，对异常样品进一步排查确认。 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 试剂 正己烷（C6H14）：色谱纯。 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 无水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯。 氢氧化钠（NaOH）：分析纯。 三氟化硼甲醇溶液：50%。 溶液配制 含2%氢氧化钠的甲醇溶液：准确称取2 g氢氧化钠（3.1.34）于烧杯中，加入甲醇（3.1.2），超声至氢氧化钠完全溶解，移入100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。 15%的三氟化硼甲醇溶液：取50%三氟化硼甲醇溶液（3.1.45）30 mL，缓慢加入到装有70 mL甲醇（3.1.2）的烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。 标准物质 十一碳酸甘油三酯（C36 H68O6，CAS：13552-80-2）标准品，纯度98%。 十一碳酸甲酯（C12H24O2，CAS：1731-86-8）标准品，纯度99%。 37种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品，各组分含量浓度参考附录A。 标准溶液配制 十一碳酸甘油三酯内标标准溶液（1000 mg/L） 称取0.10 g（精确至0.0001 g）十一碳酸甘油三酯，加入50 mL甲醇溶解，移入100 mL容量瓶中，以甲醇定容，制成储备液。储备液于-20 ℃可冷藏保存三个月。使用时以甲醇稀释成50 mg/L的中间液，现用现配。 十一碳酸甲酯内标溶液（1000 mg/L） 称取0.10 g（精确至0.0001 g）十一碳酸甲酯，加入50 mL正己烷溶解，移入100 mL容量瓶中，以正己烷定容，制成储备液。储备液于-20℃可冷藏保存三个月。使用时以正己烷稀释成50 mg/L的中间液，现用现配。 37种脂肪酸甲酯标准溶液 将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安培安瓿瓶中完全转移至10 mL容量瓶中，用正己烷定容，于-20 ℃冷藏可保存一周。 根据需要稀释成适当浓度的含5.00 mg/L十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液，现用现配。 仪器与设备 气相色谱-质谱联用仪（GC/MS）。 恒温水浴：（40 ℃～100 ℃）±1 ℃。 分析天平：感量0.1 mg。 涡旋振荡器。 烘箱。 分析步骤 样品前处理 称取样品0.1 g（精确至0.1 mg）于250 mL烧瓶中，加入50 mg/L十一碳酸甘油三酯内标1mL（相当于50 μg），加入含2%氢氧化钠的甲醇溶液（3.2.1）8 mL，混合摇匀，连接回流冷凝器并在80 ℃水浴上回流，直至油滴消失；从回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液（3.2.2）7 mL，继续回流2 min；用去离子水冲洗回流冷凝器，继续加热1 min；从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温，准确加入10 mL正己烷，振摇2 min，吸取上层正己烷相，使其通过无水硫酸钠吸水后，过0.22 μm的有机相滤膜，待GC/MS检测。 仪器条件 a.色谱柱：毛细管色谱柱（DB-23，60 m×0.25 mm×0.25 μm），或性能相当者。 b.载气：高纯氦气。 c.载气流量：1.0 mL/min。 d.进样口温度：270℃。 e.程序升温：初始温度60 ℃持续3.0 min； 60 ℃～160 ℃，升温速率15 ℃/min；保持0 min； 160 ℃～210 ℃，升温速率8 ℃/min；保持0 min； 210 ℃～230 ℃，升温速率3.15 ℃/min；保持10 min。 f.进样方式：分流进样，分流比5：∶1。 g.进样体积：1.0 μL。 h.离子源：EI，70 eV。 i.离子源温度：230 ℃。 j.四极杆温度：150 ℃。 k.接口温度：270 ℃。 l.定量分析为选择离子扫描（SIM），1314种脂肪酸甲酯的保留时间、定性及定量离子见表1。 表1 1314种脂肪酸甲酯的保留时间、定性离子和定量离子 序号 脂肪酸甲酯 定量离子(m/z) 定性离子(m/z) 保留时间(min) 1 C6:0 74 87、99、59 8.34 2 C8:0 74 87、127、59 10.44 3 C10:0 74 87、143 12.23 4 C11:0（内标） 74 87、200、143 13.08 5 C12:0 74 87、143、183