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水产品中氯霉素的测定.docx 5页

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XXX实验室检测中心 管理体系文件 作业指导书 (第A版 第0次修改) 文件编号: 编写: 审核: 批准: 批准日期: 受控状态:□ 受控 □ 非受控 正副版本:□ 正本 □ 副本 持有者: 发布日期: 实施日期: 作业指导书 文件编号: 第1页 共4页 标 题:水产品中氯霉素的测定 第A版 第0次修改 颁布日期:年月日 目的 使氯霉素的测定处于受控状态,保证氯霉素检测结果的准确性与一致性;规范参加本项目检测工作人员的操作规程。 适用范围 适用于水产品中氯霉素残留量的筛选检验。 引用标准 《动物源食品中氯霉素残留检测 酶联免疫吸附法》农业部1025号公告-26-2008 《氯霉素酶联免疫检测试剂盒说明书》 广州瑞森生物科技有限公司 《无公害食品 水发水产品》 NY 5172-2002 《分析实验室用水规格和试验方法》GB/T 6682-2008 《食品卫生检验方法 理化部分 总则》 GB/T5009.1-2003 概述 氯霉素属广谱抗生素,曾在畜牧业中广为应用。但氯霉素有较强的副作用和毒性作用,如果氯霉素在食用动物中残留,可通过食物链传给人类,长期微量摄入氯霉素,不仅使人体肠道正常菌群失调,而且还会引起多种疾病,对人类的健康造成危害。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物,并规定了在畜产品中氯霉素不得检出。 测定 原理 氯霉素酶联免疫检测试剂盒,主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的,换句话说,就是利用酶标记物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体进行竞争反应。在整个反应当中,如果样品中的氯霉素残留的越多,相对地就会竞争反应越多的酶标记物,使得能结合上抗体的酶标记物相对地减少,用TMB底物显色,样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出氯霉素含量。 仪器 酶标仪(配备450nm滤光片)。 旋转蒸发仪。 匀浆器。 振荡器。 冷冻离心机。 微量移液器:单道20μL、50μL、100μL、1000μL;多道250μL。 天平:感量0.01g。 氮气吹干装置。 作业指导书 文件编号: 第2页 共4页 标 题:水产品中氯霉素的测定 第A版 第0次修改 颁布日期:年月日 试剂和材料 以下所有试剂,均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的二级水。 乙酸乙酯。 乙腈。 正己烷。 0.5N盐酸溶液 0.5N氢氧化钠溶液 氯霉素酶联免疫试剂盒:2℃~8℃冰箱中保存。 样本处理 将3克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。 用离心机离心1700×g10分钟,取2mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。 在此玻璃管中加入正己烷1mL,先将残余物完全溶解后,再加入1mL样品稀释液,震荡30秒钟。 用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。 稀释倍数:1 若待测物为白虾可按以下流程将样品做8倍浓缩以增加检品敏感度 将6克已均质的样品放入15mL离心管中,再加入6mL乙酸乙酯,震荡5分钟。 用离心机离心1700×g 10分钟,取4mL上层液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中,于50℃下,利用氮气将有机溶剂吹干。 在此玻璃管中加入正己烷2mL,先将残余物完全溶解后,再加入0.5mL样品稀释液,震荡30秒钟。 用离心机离心1700×g 10分钟,利用吸管吸去包含中问乳化层部分的上层液(正己烷),再吸取下层液(水层)备用。 稀释倍数:0.125 酶联免疫测定 将标准品对应微孔按序编号后分别分别加入100μL氯霉素标准溶液。 在其他的微孔加入100μL已完成前处理的样品溶液。 再于每一微孔另加入50μL已完全回温的酶标记物。 轻敲酶标板四周,使其充分混合后于室温下避光静置1小时。 将微孔中的反应液甩掉,再将已稀释清洗液加满每一微孔后甩掉,重复3次。 最后一次甩掉清洗液后,在吸水纸上拍干。 于每一微孔加入显色液100μL后,轻敲酶标板四周,使其充分混合。 于室温下避光静置20分钟。 加入反应终止液,每一微孔加入100μL。 酶标仪以单波长450nm或双波长450nm/650nm读值。 作业指导书 文件编号: 第3页 共4页 标 题:水产品中氯霉素的测定 第A版 第0次修改 颁布日期:年月日 结果判定 定性判定 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含氯霉素浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.313,样品2的吸光度值为1.032,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.892;0.025ppb为1.501;0.05ppb为1.175;0.1ppb为0.751;0.3ppb为0

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