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孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
【原理】 新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合,血型系统最主要的类型为ABO血型系统本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A、BIgG抗体效价。
【试剂】 6%牛血清白蛋白生理盐水凝胶卡
【标本采集】 孕妇静脉血3毫升、孕妇爱人静脉血3毫升EDTA-NA抗凝。将孕妇标本制作成血清标本孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本用生理盐水洗涤后配制
【操作步骤】
1.取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育60分钟
2.将血清倍比稀释成9管依次为14、8、16、32、64、128、512、1024、2048管
3.将卡作好标记在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul
4. 然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本5. 37度孵育15分钟专用孵育箱
6.专用离心机离心5分钟900rpm2分钟1500rpm3分钟
7. 取出判定结果
【结果判定】
阳性结果红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中
阴性结果红细胞完全沉降到胶底部在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】 产生1+阳性凝集的最高稀释度其倒数即为效价。
【注意事项】 1.红细胞标本一定不能被细菌污染否则出现假阳性反应尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血则必须首先用该标本做阴性对照试验以确定该标本是否可以做本试验。
2.血清标本血清标本必须充分去除纤维蛋白否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出阻碍红细胞沉淀呈假阳性反应。
3.如在微柱凝胶中出现溶血现象强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应也不排除其他原因所臻溶血故对此标本一定认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
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