卵巢子宫内膜异位症病灶微血管内皮细胞的培养与鉴定.pdf

卵巢子宫内膜异位症病灶微血管内皮 细胞的培养与鉴定 欧阳卓 卢丹 张为远 [摘要] 目的 建立卵巢子宫内膜异位症 （内异症）病灶微血管内皮细胞(OEMEC)的体外培养 体系并进行鉴定。方法 采用 Ⅰ型和Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶一乙二胺四乙酸(EDTA)联合消化法，分离 卵巢内异症患者术后病理检查确诊的囊肿组织中的OEMEC，经差速贴壁法和杂细胞擦刮法纯化；采 用免疫细胞化学染色法染色，通过光镜、透射电镜观察微血管内皮细胞特异性标志物——CD34、第八 因子多克隆抗体(FⅧ-Rag)和微血管内皮细胞特异性结构——Weibel-Palade小体的表达，对所获得 的OEMEC进行鉴定。结果 光镜下观察OEMEC呈现典型的铺路石样生长；免疫细胞化学染色显示 有CD34和FⅧ-Rag的强表达，其阳性细胞的百分率分别为91.4％和92.5％；透射电镜下观察OEMEC 内可见Weibel-Palade小体的存在；培养的子代微血管内皮细胞生长良好，细胞群体倍增时间为 4.5d。结论 OEMEC体外培养体系的成功建立，对了解人OEMEC的异质性具有较好的实用价值，将 为内异症病灶中新生微血管特点的研究奠定细胞学实验基础。 子宫内膜异位症；内皮，血管；细胞，培养的 Cultureandidentificationofmicrovascularendothelialcellsfromhumanendometriosis OUYANG ZhuoLU Dan ZHANGWei-yuanDepartmentofGynecology,BeijingObstetricsandGynecologyHospital, CapitalMedicalUniversity,Beijing100026,China [Abstract] Objective Toestablishthemethodsofisolatingandculturinghumanovarian endometriosis-derivedmicrovascularendothelialcells (OEMEC).Methods Thetissuesofhuman endometrioticcystofovarywerefinelymincedwithscissors,thendigestedbycollagenase Ⅰ,Ⅱandtrypsin ethylenediaminetetraaceticacid(EDTA).Thecellswerepurifiedbyusingcentrifugationof2000 r/minspeed.OEMECwereidentifiedbylightmicroscopeandtransmissionelectronmicroscopeobserving CD34,FⅧ-RagandWeibel-Paladeinmicrovascularendothelialcells.Results TheOEMECgrewas confluentmonolayerlikecobblestonesunderlightmicroscope.CD34andFⅧ-Ragwereexpressedstrongly,and thepercentagesofCD34andFⅧ-Ragpositivecellswere91.4％and92.5％.Weibel-Paladebodiescouldbe observedunder transmission electron microscope.The time ofcell doubling proliferation was4.5 days.Conclusion TheestablishedsystemofisolatingOEMECwouldprovidelabbaseforstudyingthe mechanismsofangiogenesisinendometriosislesions. Endometriosis; Endothelium,vascular; Cells,cultured 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2011.10.01 2010年度首都医科大学基础-临床科研合作课题 (10JL59) 100026首都医科大学附属北京妇产医院妇科 万方数据 ·774· 万方数据