StepOne定量PCR仪使用和维护SOP.doc

北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司 Beijing Sino-MDgene Technology Co., LTD 作业指导书 文件编号.： 版本号： 00 页数： PAGE 5 of NUMPAGES 15 生效日期： ABI Stepone Stepone Plus PCR仪使用和维护 1.目的: 本文件为ABI Stepone Stepone Plus PCR仪建立使用和维护程序，规定了维护频 次，并 按此执行。 2.范围： ABI Stepone Stepone Plus PCR仪　　　　　　　　　　　　　 3.职责： 技术人员负责日常使用维护 设备部员工负责维修和保养。 内容： 4.1操作 4.1.1开机 PCR仪在使用前请提前20~30分钟打开预热，并检测仪器是否出现异常。 4.1.1.1打开UPS电源，待UPS正常工作并为仪器、电脑提供稳定的电流电压； 4.1.1.2打开电脑电源，等电脑正常进入操作系统，右下方出现网络连接的图标。 4.1.1.3打开PCR仪，电源按钮在仪器后方。此时仪器的主屏幕发亮，并显示仪器进入自检 状态，等待若干分钟，主显示屏进入主菜单后，仪器可以正常待用。 4.1.2装载反应板 4.1.2.1戴上无粉手套，拉开PCR扩增仪抽屉； 4.1.2.2将PCR反应板对应地安放在抽屉内的加热板上（根据PCR反应管耗材的不同，对安 放的位置会有所有求）； 4.1.2.3小心地关闭PCR扩增仪抽屉，避免PCR扩增仪有振动或移动。 4.1.3设置、运行实验 4.1.3.1 打开软件 打开电脑桌面上的StepOne Software v2.1 图标，在登入界面中直接点击右下方的 “OK”选项，此时软件检测PCR仪于电脑的连接状态，若正常连接，经过软件自检后即可进入 实验设置界面；在软件主界面选择“Set up”栏下的“Advanced Setup”选项，进入实验设置 界面；  4.1.4. 设置实验属性 在 Experiment Properties窗口下，分别选择如下设置 ①“How do you want to identify this experiment? ”栏的“Experiment Name”项输 入本次实验的名称，例如：2013-01-01-HBV； ②“Which instrument are you using to run experiment?”栏根据仪器类型而选择对 应机型； ③“What type of experiment do you want to set up”栏选择“Quantitation- Standard Curve”； ④“Which reagents do you want to use to detect the target sequence?”栏选择 “TaqMan?Reagents” ⑤“Which ramp speed do you want to use in the instrument run?”栏选择 “Standard（~2hours to complete a run）” 4.1.5. 设置实验检测项目与排版 点击主界面左方的“Plate Setup”，进入排版设置界面，在“Define Targets”栏定义 所需要检测的荧光类型，进行如下设置： ①“Target Name”一栏的名称按照检测的项目来命； ②“Reporter” 报告基团栏选择“FAM”；“Quencher”栏选择“None”； ③ 在界面右边的窗口，按照实际样本的数量，点击“Add New Sample”来增加设定样本 的数量，并直接在下方编辑样本的名字。 ③② ③ ② 当对所检测的荧光信号与样本名称定义完毕后，点击主界面上方的“Assign Targets and Samples”，进入荧光信号与样本编制界面，此时，右方会根据上述步骤（3）—②的设置而出 现对应的反应孔（96孔或48孔）同时对应PCR仪上的反应孔位置。点击所选择的反应孔，进 行如下设置： ①在左方“Assign target(s) to the selected wells”勾选