HBV分型和耐药突变基因检测.ppt

HBV分型和耐药突变基因检测 一、基因芯片原理及特点 二、HBV分型与耐药突变基因检测产品简介 三、亚能HBV分型与耐药突变基因检测的运用及临床意义 四、亚能HBV分型与耐药突变检测产品优势 一、基因芯片原理及特点 基因芯片(gene chip)：是多种特定的寡核苷酸序列为探针，固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列。 基本原理：利用碱基互补配对原则，通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息。 PCR+反向点杂交（RDB） 基因芯片原理 基因芯片技术特点 高灵敏度—PCR 高特异性--核酸分子杂交 高通量--膜芯片上排列多种探针 结果易判读--化学显色 二、HBV分型与耐药突变基因检测产品简介 乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 （PCR-反向点杂交法） 注册号：国食药监械（准）字2011第3401177号 专利号：ZL200710073933.3 国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂 PCR扩增：在S基因和P基因重叠区段设计PCR引物，PCR扩增片段既包含耐药突变位点又能进行基因分型。 P基因：耐药突变检测 编码DNA合成酶（包含逆转录酶rt），抗病毒药物作用靶区，耐药基因突变热点区S基因：分型检测 技术原理 采集样本 杂交 显色 结果判读 0.5小时 ＜3小时 1.5小时 提取DNA PCR扩增 操作流程 全程仅需6小时 仪器名称 参数及要求 台式高速离心机 转速≥13000rpm，转子规格：1.5mL 冰箱 双温区：4℃/-18℃；双门 移液器 1-10μL,10-100μL, 100-1000μL 干式恒温器 孔径：1.5 mL；控温范围：室温+5℃-100℃ PCR仪 0.2 mL，48或96孔 分子杂交仪 控温范围：环境温度+5℃-100℃，可调； 精度：0.1℃ 检测仪器 试剂盒性能指标 准确性：检测105例临床慢性HBV感染阳性样本，结果与测序比较显示为相同的 基因型和耐药突变类型，准确率为100%。 特异性：检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性；检测非HBV感染性病原体DNA，包括C型肝炎病毒（HCV）和HIV，结果均为阴性。 灵敏度：能检测血清HBV的最低检出限为1.0×103IU/mL。 精密度：检测2.0×103IU/mL的血清HBV，批内和批间的一致性好。 稳定性：产品有效期为6个月，在有效期内产品性能稳定。 本产品检测的样本为血清或血浆； 要求待检样本的HBV DNA载量≥1.0×103copies/mL。 样本要求 样本保存 为了避免DNA降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置； 2～8℃保存不超过48小时；-18℃以下保存不超过半年，避免反复冻融。 注意事项 三、亚能HBV分型与耐药突变基因检测的运用及临床意义 亚能HBV产品应用 抗病毒治疗前、治疗中HBV的基因分型和耐药突变基因检测 区分我国常见的HBV-B、C、D基因型 涵盖我国4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、 替比夫定、恩替卡韦）7个耐药位点的16种突变：rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L。 HBV基因型检测临床意义 HBeAg阳性患者中，B基因型对IFN-α治疗的应答率高于C基因 型，A基因型高于D基因型。 与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学 转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌； 预测干扰素应答和疾病进展情况 《慢性乙型肝炎防治指南（2010年）》 HBV耐药检测临床意义 抗病毒治疗前，预存耐药检测 协助临床选择合理抗病毒药物，实现个体化抗病毒治疗、提高抗病毒疗效、降低耐药发生率。 抗病毒治疗中，全程耐药监测 全程监测耐药，利于早期挽救治疗，为调整治疗方案提供理论支持。 全程监测耐药，为调整治疗方案提供理论依据 四、亚能HBV分型耐药突变检测产品优势 全基因序列测定法 限制性片段长度多态性分析法（RFLP） 实时荧光 PCR法 亚能HBV 基因芯片 灵敏度 灵敏度低，最低检测限为20%； 灵敏，最低检测限为5%； 灵敏，最低检测限为5%； 灵敏，最低检测限为5%； 检测位点 所有突变位点 已知耐药位点 仅能检测rt204位点 我国4种核苷类药物7个耐药位点的16种突变 评价 1、测序试剂大多未获得SFDA批准； 2、操作繁琐、技术难度大、仪器要求高、不易在临床开展。 1、需针对每一个待测突变位点，分别设计特异性内切酶反应体系； 2、一些突变可能生成新的酶切位点，或破坏原有酶切位点，必须谨慎看待检测结果。 结果仅提示拉米夫定耐