心肌标记物的测定医学培训课件.ppt

心肌标志物测定 * * 心肌细胞 * 目前实验诊断的项目有两大类，即与心肌收缩细胞有关的： 一、心肌酶 二、心肌蛋白 * 实验目的 掌握：乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶及同工酶（CK/CKMB）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌钙蛋白（金标法）测定原理； 脱氢酶指示系统测定原理。 熟悉： 心肌梗死时各指标的变化 了解：心肌标志物的临床意义 * 实验安排 肌钙蛋白 cTnI 手工 天冬氨酸氨基转移酶AST 乳酸脱氢酶LDH 肌酸激酶 CK 半自动 肌酸激酶同工酶CK-MB * 肌钙蛋白(cTnI) 金标法 cTnI检测卡利用高特异性的抗原抗体反应原理和免疫层析分析技术来检测血清中的cTnI。 * * 方法：往样本孔垂直加入3滴或120μl样本，在10-20min判读结果，20min后判读结果无效。 ?NAD+? NADH?+?H+ 脱氢酶 脱氢酶指示系统： NADP+? NADPH?+?H+ NADH/NADPH在340nm处有特异吸收峰，可在340nm处连续监测 NADH/NADPH的生成量/消耗量，根据线性反应期吸光度上升/下降速率（+/- △A/min ），计算出酶的活性浓度。 * 天冬氨酸氨基转移（AST）速率法 340nm * 试剂：R1 NADH、a-酮戊二酸、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶 R2 L-天冬氨酸、Tris缓冲液 操作步骤： 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，空白管调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到-△A/min R1+R2=R 空白管 样本管 样本 ---- 0.30ml 蒸馏水 3.30ml ---- 工作液 ---- 3.00ml K=1740 计算 酶国际单位（U）:实验规定的条件下（最适温度，最适PH，最适底物浓度时），每分钟催化一个微摩尔底物变化所需要的酶量。 22 * 乳酸脱氢酶（LDH）(速率法） L-乳酸+?NAD+? 丙酮酸?+?NADH?+?H+ ? LDH 340nm * 试剂：R1 NAD R2 乳酸 、氯化钾、缓冲液 操作步骤： R1+R2=R 空白管 样本管 样本 ---- 0.06ml 蒸馏水 3.06ml ---- 工作液 ---- 3.00ml 样本和试剂迅速混匀后，340nm波长，空白管调零， 室温测定1、2、3分钟的吸光度，得到△A/min K=4180 22 * 肌酸激酶(CK)酶偶联法 340nm * 试剂：R1 己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、ADP、AMP、 NAC、 Ap5A、磷酸肌酸、NADP R2 缓冲液、葡萄糖 操作步骤： 混匀后立即上机(吸样量500ml） R1+R2=R 空白管 样本管 样本 ---- 0.02ml 蒸馏水 1.0ml ---- 工作液 1.0ml * K=8199 22 * 肌酸激酶同工酶(CK-MB)（免疫抑制法） 340nm CK-B * 试剂：R1 己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、ADP、AMP、 NAC、 Ap5A、抑制CK-M抗体、磷酸肌酸、NADP R2 缓冲液、葡萄糖 操作步骤： 混匀后立即上机(吸样量500ml） R1+R2=R 空白管 样本管 样本 ---- 0.04ml 蒸馏水 1.0ml ---- 工作液 1.0ml * K=8360 22 * 注意事项 反应准确计时 检测标本最好用新鲜标本 溶血的影响 实验安排 方法 试剂 AST LDH 手工法 手工法 10毫升，每组一瓶 10毫升，每组一瓶 CK CK-MB 上机 上机 10毫升，每4组一瓶 2.5毫升，每组一瓶 * 思考题： 1、LDH、CK及CK-MB、AST、 cTnI的临床意义 2、理想的心肌标志物应具备哪些特征？ * cTnI检测卡是利用两个单克隆抗cTnI抗体的单一结合来检测游离cTnI和复合cTnI。当样本(3滴或120μl)滴到吸收孔内。第一个抗cTnI抗体-胶体金与cTnI结合形成一个抗体-抗原结