2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 ?是 分离能分解尿素的 细菌 判断该培养基有无选择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长能分解尿素的细菌 能生长多种微生物 是 二、实验设计 3、样品的稀释 ◆在火焰旁称取土壤10g，倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。依次等比稀释至106稀释度 ◆稀释土壤溶液的过程，每一步都要在火焰旁进行。 二、实验设计 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是 ，其目的是保证获得 的平板。 细菌稀释度一般为 ， 放线菌稀释度为 ， 真菌稀释度为 。 不同微生物在土壤中含量不同 菌落数在30～300之间、适于计数 104、105、106 103 、 104、105 102、103、104 如果是初次实验，稀释范围如何确定？ ① 选择涂布的稀释液范围是？至少要几个培养皿进行涂布？ ②如何避免这么多的试管和培养皿混淆？（P25） 二、实验设计 取样涂布 ◆选取适合的稀释范围分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 二、实验设计 4、培养与观察 ①培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 ③观察选择培养基中菌落特征－－形状、大小、隆起及颜色等找出分解尿素的细菌有多少种 ②比较完全培养基和选择培养基中菌落 的数量、形态等，并做好记录。 完全培养基中菌落数量形态明显多于选择培养基 二、实验设计 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 5、计数 二、实验设计 〖旁栏〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被 感染，实验后一定要洗手。 致病微生物 三、操作提示 阅读P25页 1、无菌操作 2、做好标记 3、制定计划 四.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍数计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 本课题知识小结: 分离计数土壤中能够分解尿素的细菌的实验过程 ☆本实验的其他注意事项： ①本实验的无菌操作； ②做好标记 ③本实验需事先制定计划。 ☆本实验对所选细菌的鉴定： 酚红指示剂 分离计数土壤中能够分解尿素的细菌的实验过程 1.土壤取样： ①选什么样的土壤取样？ ②取多深的土样？ ③取号的土样应该装在哪里？ 2.制备培养基： ①培养基配制的基本过程是？ ②本实验需要设置对照—— 以尿素为唯一氮源的选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 分离所需菌种 判断选择培养基是否起到了选择作用 实验组 对照组 分离计数土壤中能够分解尿素的细菌的实验过程 3.稀释涂布平板接种： ①如何进行系列稀释操作？ ②如果是初次实验，稀释的范围如何确定？要用几个灭菌试管和锥形瓶？ ③如果是初次实验，选择涂布的稀释液范围是？要用几个培养皿进行涂布？ ④如何避免这么多的试管和培养皿混淆？ 4.培养观察： ①涂布好的培养皿在哪儿培养？培养的温度和时间是？ ②培养过程中，观察菌落的特征，具体包括哪些内容？ 分离计数土壤中能够分解尿素的细菌的实验过程 5.计数： ①微生物培养过程中，每隔多久要统计一次菌落数目？ ②应选取何时的统计记录作为结果？ ③计数公式是？ ☆本实验的其他注意事项： ①本实验的无菌操作； ②本实验需事先制定计划。 ☆本实验对所选细菌的鉴定： 酚红指示剂 5、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是