第三章核酸的结构与功能.ppt

tRNA的三级结构 tRNA的三级结构 均呈倒L字母形，其3’末端含CAA-OH的氨基酸臂位于一端，反密码环位于另一端。 tRNA的三级结构的稳定力是核苷酸之间的各种氢键。 三、核蛋白体RNA( rRNA) rRNA与蛋白质结合形成的核蛋白是细胞内蛋白质合成的场所。 rRNA 分子大小不均一，真核细胞的rRNA有4种，其沉降系数分别为28S、58S、5S和18S。大约与70种蛋白质结合而存在于的核蛋白体的大小亚基中 rRNA的二级结构为茎环样结构。 四、核酶(ribozyme) rRNA前体的自我剪接是由内含子催化的，其本质是RNA。具有酶的催化活力的RNA就称为核酶，核酶的发现改变了酶都是蛋白质的传统概念。 第五节核酸的理化性质及其应用 核酸的一般性质 核酸分子通常表现为较强的酸性。 由于DNA分子细长，其在溶液中的粘度很高；RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。 ? 核酸的紫外线吸收 核酸分子中的碱基都含有共轭双键，在260nm波长处有最大紫外光吸收。 蛋白质在280nm波长处有最大吸收，所以可利用溶液260nm和280nm处吸收光度（A）的比值来估计核酸的纯度。 DNA的理化性质及其应用 变性 复性 增色效应 减色效应 解链温度 杂交 探针 DNA的理化性质及其应用 变性 复性 增色效应 减色效应 解链温度 杂交 探针 核酸的变性与复性 （一）变性 DNA变性是指在某些因素的作用下，维系DNA双螺旋的次级键发生断裂，双螺旋DNA分子被解开成单链的过程。 引起DNA变性的因素有加热和化学物质的作用。 变性可使其粘度下降和紫外吸收值的改变等。 2．增色效应和解链温度（Tm）。 3．G＋C含量越高，Tm值越大；A＋T含量越高，Tm越值小。 （二）复性 1．解开的两条链重新缔合形成双螺旋，称为DNA的复性或退火。 2．退火温度：比Tm低25℃。 变性和复性 双链分开和重新形成双链这样的过程称为变性和复性。 破坏氢键形成的因素都可能使DNA变性，如过量的酸、碱或加热。 变性与复性 增色效应和减色效应 OD260 : 单核苷酸单链DNA双链DNA DNA变性时，溶液的OD260增高，称为增色效应。 在解链曲线中的中点称为中点解链温度，或解链温度(Tm)。 变性和复性是可逆的，热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，故复性也称为退火(annealing) 杂交 杂交：不同的DNA链放在同一溶液中作变性处理，或把单链DNA和RNA放在一起，局部的碱基配对，就可以形成局部双链。这一过程称为杂交。 杂交的应用。 核酸分子杂交是根据两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则退火形成双链的原理，用已知的单链核苷酸片段作为探针检测样本中是否存在与其互补的同源核酸序列的方法。 ? 常用的核酸分子杂交方法： Southern 印迹杂交、Northern 印迹杂交 斑点杂交、狭缝杂交 原位杂交（菌落原位杂交、细胞原位杂交、 组织片原位杂交） 夹心杂交 探针 探针：在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于研究和诊断的新技术称为探针技术。 单链的核苷酸聚合体标记后，就可以称为探针。 探针 探针技术：在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于研究和诊断的新技术。 探针(probe)：经同位素标记的具有特定碱基序列的单链核苷酸聚合体。 探针可用于：基因诊断、致病基因的定位、Southern blotting、Northern blotting、原位杂交、DNA芯片技术等临床实践和科研。 第六节 核酸酶限制性内切酶的应用 Alu I ….AGCT….. ….AG CT... …..TCGA….. ….TC GA... ? ? BamH I …GGATCC… ...G GATTC... ...CCTAGG… …CCTAG G... ? 小 结 DNA的组成与结构及性质 一级：碱基序列 二级：双螺旋结构 三级：核小体、超螺旋等 RNA的组成与结构 mRNA：遗传密码及其性质 tRNA：三叶草、倒L型结构、反密码子 rRNA：大、小亚基组装而成 DNA与RNA的区别 * DNA的双螺旋结构 DNA的双螺旋结构 DNA分子由两条脱氧核糖核酸作骨架的双链组成，以右手螺旋方式盘旋 糖－磷酸骨架均位于外侧，碱基