环境微生物试验.doc

簡單染色法及革蘭氏染色法 1.前言 簡單染色法:利用單一染料使微生物細胞著色之方法，單染法多應用觀察細菌基本外形，菌體排列狀態及菌體成分分析。 革蘭氏染色法:用一種以上染劑所使用的染色法來區分細胞間或細胞某部位的染色及鑑別菌體或菌體中的特殊部分 並有兩個目標 (1)微生物的分組分類，達成分類鑑定 (2)用於細胞構造上之觀察 微生物學上重要廣泛使用的鑑別染色法，方法簡單，判定容易。 目的 簡單染色法: 簡單染色法可應用在驗證細菌是否為活菌或死菌及所謂活體染色，其原理是利用中性染料的稀釋液，對細菌進行染色，當細菌失去活性成為死菌時，菌體會被染料所滲透而活細菌則不會。 革蘭氏染色: 革蘭氏染色原理主要是利用僅存革蘭氏陽性菌體的核醣核酸鎂鹽蛋白質醣類複合物與染劑間的作用，此複合物質會染劑中的結晶子集點分子形成一種無法被酒精及水所溶解的性質，保留複合物之生成。 2.步驟 簡單染色法: (1)先拿載玻片，並滴(一滴)菌液 (2)再拿另一載玻片以45度前後塗抹均勻 (3)以酒精燈來回烘乾播片上之菌液 (4)並以甲烯藍染色之30秒至1分鐘 (5)用清水反面滴除多餘染劑 (6)以稀水紙吸去玻片上之水分 (7)先以10*10之倍率找尋菌株 (8)再用10*40之最大倍率觀察並用來會出其形狀 革蘭氏染色: (1)先拿載玻片，並滴(一滴)菌液 (2)在拿另一載玻片以45度前後塗抹均勻 (3)以酒精燈來回烘乾載玻片上之菌液 (4)用結晶紫染色1分鐘 (5)反面水洗 (6)用碘液作用1分鐘 (7)反面水洗 (8)用酒精脫色30秒 (9)反面水洗 (10)用番紅進行對比染色30秒 (11)反面水洗 (12)用吸水紙吸去玻片上之水分 (13)先以10*10之倍率找尋菌株 (14)再用10*40之最大倍率觀察並用手繪出其形狀 註(13)大腸菌為陰性菌→紫紅色 枯草為陽性菌→藍紫色 未知為陰性菌→紫紅色 器材 簡單染色法: 載玻片、酒精燈、攝子、光學顯微鏡、滴管、碼錶、吸水紙、打火機、自製滴試劑盒 試劑: 甲烯藍 菌種: 枯草菌液、大腸菌液、未知菌液 革蘭氏染色: 載玻片、酒精燈、攝子、光學顯微鏡、滴管、碼錶、吸水紙、打火機、自製滴試劑盒 試劑: 結晶紫、碘液、酒精、番紅 菌液: 大腸菌液、枯草菌液、未知菌液 3.結果: 簡單染色法: 菌名:枯草 菌名:大腸桿菌 菌名:未知 放大倍率:10*40 放大倍率:10*40 放大倍率:10*40 形狀:桿狀 形狀:桿狀 形狀:桿狀 顏色:藍色 顏色:藍色 顏色:藍色 圖片: 圖片: 圖片: 革蘭氏染色法: 菌名:枯草 菌名:大腸桿菌 菌名:未知 放大倍率:10*40 放大倍率:10*40 放大倍率:10*40 形狀:桿狀 形狀:桿狀 形狀:桿狀 顏色:藍紫色 顏色:紫紅色 顏色:紫紅色 圖片: 圖片: 圖片: 4.問題與討論: 簡單染色法: Q.1簡單染色法的原理以及在環工上的運用 利用單一染料使微生物細胞著色的方法。 Ans: 用在判定於活性污泥的活化程度，以解此了解整個系統運作的成效 Q.2繪圖說明簡單染色法的實驗流程,為何流程中必須進行固定的步驟 Ans: 先拿載玻片，並滴(一滴)菌液 再拿另一載玻片以45度前後塗抹均勻 以酒精燈來回烘乾播片上之菌液 並以甲烯藍染色之30秒至1分鐘 用清水反面滴除多餘染劑 以稀水紙吸去玻片上之水分 先以10*10之倍率找尋菌株 再用10*40之最大倍率觀察並用來會出其形狀 Q.3何謂活體染色 Ans: 用於驗證細菌是否為活菌或死菌就稱為活體染色。 Q.4是說明本實驗中活性汙泥為樣品所得到的實驗結果,活性汙泥式手已經老化?你是依據什麼原理進行判斷? Ans: 利用中性染料的稀釋液，對細菌進行染色，當細菌失去活性成為死菌時，菌體被染料所滲透，而活