玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生-园艺学报.pdfVIP

园　艺 　学 　报 　2001 , 28 (4) : 301～306 Acta Horticulturae Sinica 玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生 王子成 　邓秀新 (华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 , 武汉 430070) 摘 　要 : 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究 。约 10 mm 长的柑桔茎 ( ) 尖于含 5 %二甲基亚砜 DMSO 的培养基上预培养 3 d , 切取 2 ～2 . 5 mm 长的茎尖 , 室温下 60 %玻璃化溶液 2 (PVS ) 装载 20～30 min , 然后用 PVS 于 0 ℃处理 50～60 min , 换入新鲜的 2 2 PVS , 迅速投入液氮中 , 24 h 后在 40 ℃水浴中迅速化冻 , 再用 1. 2 mol/ L 蔗糖培养基洗涤 2 2 次 , 接种于含 BA 1. 0 mg/ L 的MT 培养基上 , 26 ℃暗培养 1 周后转于正常光下培养 。枳壳茎尖 超低温保存后用氯化三苯基四氮唑 ( TTC) 法检测 , 成活率为 100 % , 培养再生率达到 90 % , 再生后的苗能正常生根 , 与对照没有形态上的变异 , 移栽可成活 。 关键词 : 柑桔 ; 茎尖 ; 超低温 ; 玻璃化法 中图分类号 : S 666 ; Q 813 　 文献标识码 : A 　 文章编号 : 0513353X (2001) 液氮超低温保存是 目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法 。在液氮条件下 , 活细 胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止 , 植物材料处于相对稳定的生物学状态 〔1〕。为了 在液氮条件下保存种质资源 , 人们已试验了很多种方法 , 已有达百种以上的植物材料进行 了超低温保存 , 取得了很多进展 。迄今 , 尽管成功地保存了多种植物材料的许多细胞类 型 , 但其实际操作仅在较少情况下能够简易进行 , 对体积较大的由已分化的多种细胞类型 组成的组织和器官 , 如茎尖的保存则常常难以奏效 。而近几年发展较快的玻璃化法以其设 备要求简单 、材料处理步骤简便 、效果和重演性好等优点 〔2 ,3 〕, 倍受人们推崇 , 成为较理 想的植物种质资源保存方法 。利用玻璃化法已成功地保存了十几种植物的茎尖 〔4 〕。柑桔胚 性愈伤组织的玻璃化超低温保存前人已做了很多研究 , 试验体系已基本完善 〔5 〕。本试验用 玻璃化法进行柑桔茎尖的超低温保存 , 以期建立起柑桔茎尖的超低温保存体系 , 为长期稳 定保存柑桔种质资源提供技术支持 。 1 　材料与方法 1. 1 　材料 品种或类型 : 枳壳 ( Poncirus trfi oliata) , 439 〔瓯柑 Citrus suavissima Hort . et Tanaka ×改 良橙 C. sinensis (L . ) Osbesk cv. Gailiangcheng 〕, 红肉脐橙 〔C. sinensis (L . ) Osbesk cv. Cara cara 〕和　柑 ( C. reticulata Blan co cv. Ponkan) 。 1. 2 　方法 收稿 日期 : 2000 - 12 - 12 ; 修回日期 : 2001 - 02 - 21 ( ) 基金项 目: 国家自然科学基金资助项 目 通讯联系人 。