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三级结构模型可分为： 全α型 α-螺旋 40% β-折叠 5% 全β型 α-螺旋 5% β-折叠 40% α+ β型： α-螺旋、 β-折叠均大于15%，这两种结构在空间是分离的， 60%的折叠链是反平行的 α/β型： α-螺旋、 β-折叠均大于15%，这两种结构在空间上 是相间的， 60%的折叠链平行排列 (d)研究氨基酸残基的微环境： 蛋白质中芳香氨基酸残基： 色氨酸(Trp) 酪氨酸(Tyr) 苯丙氨酸(Phe) 二硫鍵 处于不对称微环境时250-320nm出现CD信号 Trp:279,284和291nm Tyr:277nm Phe:255,261和268nm 二硫鍵:整个近紫外CD谱 例：阳离子表面活性剂CPB诱导BSA构象CD光谱的变化 Figure 3 Far-UV CD (a) and near-UV CD (b) spectra of BSA and BSA in CPB 1. BSA; 2. BSA in 1.0?10-5mol/L CPB; 3. BSA in 1.0?10-4 mol/L CPB 由远紫外CD谱可以看出 α-螺旋 β-折叠 BSA 49% 9.8% CPB（第一CMC） 78% 7.6% CPB（第二CMC） 37% 10.5% 由近紫外CD谱可以看出 自然状态下BSA分子的near-UV CD光谱图中在261 和268 nm处有最小值，在277 和284 nm处有两个肩峰。当加入CPB后，261和268 nm处的椭圆率增加，而280 至300 nm处的椭圆率降低，表明此时氨酸酸残基周围环境的极性发生了变化 ，这种变化是由于双硫键桥的不对称性遭到破坏而引起BSA分子三级结构变化的结果。 (2) 核酸 278nm有一强正的cotton效应-对应于碱基的堆积 248nm有一弱的负的cotton效应-对应于螺旋性(形) Z-form: 290nm有一负的cotton效应 A-form: 280nm有正的cotton效应 243nm有负的cotton效应 正的强度约为负的强度的3倍 (b) 典型的DNA构型 B-form: 277nm有正的cotton效应 245nm有负的cotton效应 C-form: 285nm有正的cotton效应(弱) 250nm有负的cotton效应(强) 3、诱导园二色谱 (1)主客体化合物 主体为手性 客体为非手性， 但有吸收 会产生诱导园二色谱 例如环糊精与客体相互作用 包结-产生诱导园二色谱 客体结合在环糊精外部-不产生诱导园二色谱 若客体的电偶极矩与环糊精Z轴重合——正cotton效应 若客体的电偶极矩与环糊精Z轴垂直——负cotton效应 六、实验中几个注意事项 用N2除臭氧和氧气； 样品的浓度应使其吸光度在0.6—1.2之间，可得到较好 的信躁比，对蛋白质来说浓度在0.2mg/mL，池子长度 是1mm，池体积是350mL； 溶剂和缓冲溶液选择的原则是使样品在测定的波长范围 内其吸光度尽量的小（溶剂的吸收表如下）；不能用 HCl来调pH，因为在低的UV波段Cl-离子会干扰CD的 测定 狭缝带宽（SBW）的选择：SBW应保持至少为NBW （被扫描物质的自然带宽）的十分之一； 在远紫外一般为2nm； 如果NBW不知，可选择不同SBW进行实验； 溶剂的吸收表 Acceptable:1. Potassium Phosphate with KF, K2SO4 or (NH4)2SO4 as the salt.2. Hepes, 2mM.3. Ammonium acetate, 10mM. Avoid: Tris; NaCl; Anything optical active, e.g. Glutamate 旋光光谱和圆二色谱 旋光光谱（optical rotatory dispersion， ORD） 圆二色谱（circular sichroism， CD） 分别于20世纪50年代和60年代发展起来的仪器分析方法，都是利用电磁波和手性物质相互作用的信息来研究化合物的立体结构及其它有关问题。 偏振光与手性物质的相互作用 旋光光谱 圆二色谱 康顿效应及ORD、CD和UV间的关系