四 酶促反应动力学和影响因素.pptx

四、酶促反应动力学和影响因素;米氏方程 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。 ;E enzyme S substrate ES enzyme-substrate complex P product ;酶 动 力 学 基 本 推 导 过 程;酶促反应处于稳态时;[Et] 酶的总浓度，[Ef]自由的酶浓度，[ES]与底物结合的酶浓度;;若把所有的酶 [Et] 都变成 [ES]时，将会达到想像中的最高速率 Vmax，则可写成 (IV) 式 Vmax = k3 [Et]。 ;Enzyme Kinetics Examples;Enzyme Kinetics Examples;Enzyme Kinetics Examples;酶反应速度与底物浓度的关系曲线; 米氏常数Km的意义:;; 酶除了要有良好的驱动能力外，还需要有灵敏的刹车系统;酶抑制剂在医药上，有很重要的应用 ;Sarin毒气也是一种酶抑制剂，不可逆抑制乙酰胆碱酯酶 ; 抑制剂对酶反应的影响 有些物质能与酶分子上某些必须基团结合（作用),使酶的活性中心的化学性质发生改变，导致酶活力下降或丧失，这种现象称为酶的抑制作用。 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂（inhibitor)。　 酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a. 在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。 b. 能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 ;抑制作用的类型： (1) 不可逆抑制作用： 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。;非专一性不可逆抑制剂;专一性不可逆抑制剂 ;青霉素类抗生素是β-内酰胺类中一大类抗生素的总称。青霉素药理作用是干扰细菌细胞壁的合成。青霉素的结构与细胞壁的成分中的D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。 ;(2)可逆抑制作用： 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类： 竞争性抑制：;竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ： ;;;延胡索酸酯;非竞争性抑制： 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 非竟争性抑制不能通过增大底物浓度的方法来消除。 非竞争性抑制可用下式表示：;纯粹非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：;纯粹非竞争性抑制 Vmax降低，Km值不变。 等于从溶液中移走了酶分子;有反竞争性抑制剂存在时，Km和V值均减小(1+[I]/Ki)倍，且都随[I]的增高而降低。;反竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：;3.激活剂对酶反应的影响 凡是能提高酶活力的简单化合物都称为激活剂（activator)。其中大部分是一些无机离子和小分子简单有机物。如：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Co2+、Cr2+、Fe2+、Cl-、Br-、I-、CN-、NO3-、PO4-等； 这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合，可能是酶活性部位的组成部分，也可能作为辅酶或辅基的一个组成部分起作用； 一般情况下，一种激活剂对某种酶是激活剂，而对另一种酶则起抑制作用； 对于同一种酶，不同激活剂浓度会产生不同的作用。 ;4.酶浓度对酶反应的影响 在底物足够过量??其它条件固定的情况下，并且反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度和酶浓度成正比。;5. 温度对酶反应的影响 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下, 反应速度最大。;6. pH对酶反应的影响 在一定的pH下, 酶具有最大的催化活性,通常称此pH为最适pH。;糜蛋白酶翻译后需被剪切成三条肽链才有活性;pH值在9左右为N端氨基的pKa值;新的Ile 16 N-端可稳定ASP 194, 使Ser正确定位